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双模态对比剂Fe3O4-Cy5.5-NGR在卵巢癌的体外靶向效能研究
目的 合成并验证磁共振-荧光双模态对比剂Fe3O4-Cy5.5-NGR对卵巢癌ES-2细胞的体外靶向效能情况.方法 化学方法合成Fe3O4-Cy5.5-NGR颗粒作为实验组对比剂,Fe3O4-Cy5.5颗粒作为对照组对比剂,在透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)、红外光谱仪(far infrared spectrometer,FITR)和紫外分光光度仪(ultraviolet spectrophotometer-2600,UV-2600)等设备下检测对比剂的普通物理化学性质是否满足成像需要;选取ES-2人卵巢癌透明细胞株传代培养,细胞生长稳定后进行CD13免疫组织化学染色,观察细胞膜表面CD13表达量;两种对比剂与ES-2细胞共同孵育后检测粒子的细胞毒性,并用流式细胞仪验证细胞与粒子的体外特异性结合情况.在7.0TMR下验证磁性纳米颗粒Fe3O4-Cy5.5-NGR和Fe3O4-Cy5.5作为MR对比剂的磁敏感性.结果 TEM观察两种对比剂形态规则,水溶液中分散性良好,通过连接NGR短肽,实验组对比剂的平均直径达(8.930±0.773)nm,对照组对比剂直径约(7.480±0.695)nm;Fe3O4-Cy5.5-NGR和Fe3O4-Cy5.5激发波为628.0 nm,发射波为675.2 nm;FITR中Fe3O4-Cy5.5-NGR和Fe3O4-Cy5.5在2 882 cm-1、1 632 cm-1处出现特征性波峰,实验组对比剂在841 cm-1处另外出现了波峰.细胞毒性实验(CCK-8)中对比剂与细胞共孵育后,细胞活性保持在90％左右.细胞免疫组织化学染色,荧光显微镜观察细胞呈侵袭性生长,细胞膜位置CD13高表达,细胞核及周围间质表达量很低.Fe3O4-Cy5.5-NGR和Fe3O4-Cy5.5对比剂r2值分别为155.49 mmol·L-1·s-1,180.74mmol·L-1·s-1.流式细胞仪下观察到Fe3O4-Cy5.5-NGR较Fe3O4-Cy5.5对比剂的荧光强度高,在不同浓度(40、80和1601μmol)分别为后者的3.1、1.65和1.26倍.结论 Fe3O4-Cy5.5-NGR作为磁共振-荧光双模态对比剂在ES-2细胞的体外靶向性能良好,可以满足体外成像需求,为进一步的裸鼠卵巢癌在体实验提供了实验基础.
