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甘草总皂苷生物转化与抑制酪氨酸酶活性研究
目的:采用不同方法对甘草皂苷进行生物转化,同时进行抑制酪氨酸酶活性实验.方法:采用水作为媒介提取甘草中的总皂苷,再采用D101大孔树脂进行富集,得到甘草总皂苷有效成分;再分别采用蜗牛酶、酵母菌、黑曲霉对甘草总皂苷进行生物转化,以HPLC作为测定仪器,测出甘草苷转化为甘草酸铵的量.同时采用体外抑制酪氨酸酶活性的试验来比较各个不同生物转化液的活性大小.结果:以甘草苷、甘草酸铵为对照品,得出两者的标准曲线:Y=2926525. 09X+1632. 2 (r=0. 99996), Y=659561X+33746 (r=0. 99998),结果表明甘草苷和甘草酸铵分别在0. 4920 ～ 9. 8400 μg、0. 4520～9. 0400μg范围内线性关系良好.采用蜗牛酶、酵母菌、黑曲霉对甘草苷进行生物转化,结果显示酵母菌并不能使甘草中的甘草苷转化为甘草酸铵.观察HPLC图谱,蜗牛酶、黑曲霉转化液下的样品在68. 13～71. 48 min之间出现了甘草酸铵峰.抑制酪氨酸酶试验得出通过3种方法转化后的甘草溶液,其活性顺序为酵母菌>蜗牛酶>黑曲霉.抑制率分别为39. 45％、12. 41％、9. 42％.说明抑制酪氨酸酶活性的物质为总皂苷,并不是其生物转化后的次生苷.结论:甘草总皂苷抑制酪氨酸酶的活性要大于其生物转化后的次生产物,可以很好地进行化妆品的后期开发.
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甘草总皂苷的提取纯化工艺研究
目的:研究提取纯化甘草总皂苷的工艺条件及参数.方法:以正交试验考察了甘草总皂苷的提取工艺;以甘草总皂苷质量浓度为指标,考察了大孔树脂纯化工艺.结果:甘草总皂苷佳提取工艺:加水量8倍,煎煮时间2 h,煎煮次数3次;HPD-300型树脂具有较好的吸附性能和解吸效果,纯化工艺为上样液质量浓度为0.2 g生药/mL,上样量5 BV,50%乙醇洗脱6BV.结论:HPD-300树脂对甘草总皂苷的吸附量大,解吸容易,确定的吸附和洗脱条件易操作,可用于工业化生产.
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甘草总皂苷及甘草酸对Caco-2细胞P-gp功能和表达的影响
目的 研究甘草总皂苷及其主要成分甘草酸对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,进一步探讨甘草配伍解毒可能的作用机制.方法 采用流式细胞仪检测罗丹明-123经甘草总皂苷和甘草酸处理后Caco-2细胞对其摄取量的差异评价P-糖蛋白的外排功能;采用western blot检测Caco-2细胞经甘草总皂苷和甘草酸处理后P-糖蛋白表达的差异.结果 经过1h的干预,5、10、50 μg/mL的甘草总皂苷和甘草酸使细胞内罗丹明-123的荧光强度较阴性对照组相比显著减少41.4％、37.4％、34.8％;33.3％、29.9％、27.5％,对P-gp功能表现出诱导作用(P＜0.05).高质量浓度的甘草总皂苷(100、200、400 μg/mL)和高浓度的甘草酸(100、200、400 μmol/L)对细胞内罗丹明-123的荧光强度影响不显著(P＜0.05).经过72 h甘草总皂苷、甘草酸的干预,荧光强度较阴性组相比分别显著增加(P＜0.05),呈现剂量依赖性.结论 甘草总皂苷、甘草酸在一定剂量范围内既增强Caco-2细胞P-gp的功能,又能上调P-gp的表达.甘草酸可能是甘草总皂苷影响P-gp功能和表达的有效成分.
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大孔吸附树脂纯化甘草总皂苷
目的:研究甘草总皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺.方法:以紫外分光光度法测定3种树脂对甘草总皂苷的吸附率、解吸率,以甘草总皂苷的吸附率、洗脱率、比吸附量、比洗脱量为考察指标综合评价.对吸附、纯化等工艺参数进行考察.结果:将5 mg·mL-1(甘草总皂苷含量)的提取液pH调为7.0,以2 BV·h-1的流速上样于D-101大孔吸附树脂柱,用2 BV水洗净,pH为8.0～9.0的50%乙醇以2 BV·h-1的速度洗脱,收集4 BV的洗脱液洗脱效果较好.结论:甘草总皂苷部位可使甘草总皂苷的收率和质量分数达到较满意效果.
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不同产地甘草有效成分含量分析
目的 对不同产地甘草中甘草酸、甘草苷以及甘草总皂苷进行含量测定.方法 采用高效液相色谱法测定甘草酸、甘草苷的含量.色谱柱为Thermo sentific ODS-2 Hypersi1,流动相为乙腈-0.05％磷酸;以甘草酸单铵盐为对照品,香草醛-高氯酸为显色剂,比色法测定甘草总皂苷含量.结果 测得不同产地不同种植方式甘草中甘草酸和甘草苷含量符合2010年版药典标准.结论 不同产地以及不同种植方式的甘草中,甘草酸、甘草苷及甘草总皂苷的含量差异较大,可为甘草规范化种植提供依据.
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甘草总皂苷的制备及其保肝作用的研究
目的:制备甘草总皂苷,同时探讨甘草总皂苷对四氯化碳致急性肝损伤和DL-乙硫氨酸致急性脂肪肝的保护作用.方法:应用大孔树脂法,富集甘草总皂苷部位.以四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型和DL-乙硫氨酸致急性脂肪肝模型,考察甘草总皂苷部位对小鼠血清丙氨酸氨基转移酶ALT及天冬氨酸氨基转移酶AST活性的影响,同时考察其对DL-乙硫氨酸致急性脂肪肝模型肝组织总胆固醇及甘油三酯含量的影响.结果:采用HPD400型大孔树脂,30%乙醇除杂,50%乙醇洗脱可得到总皂苷含量50%以上的甘草总皂苷部位.对四氯化碳致急性肝损伤模型,甘草总皂苷可显著降低CCl4导致的小鼠血清ALT和AST活性的升高;对DL-乙硫氨酸致急性脂肪肝模型,模型组与各治疗组小鼠血清ALT和AST活性与正常对照组之间无显著性差异,而模型组小鼠肝组织总胆固醇和甘油三酯含量显著升高,治疗后又明显降低.结论:甘草总皂苷对CCl4致小鼠急性肝损伤和DL-乙硫氨酸致小鼠急性脂肪肝具有一定的保护作用.
