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紫杉烯合酶文献资料
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大肠杆菌组合生物合成紫杉烯的研究
目的在大肠杆菌中建立一个能够生物合成紫杉烯(紫杉醇生物合成的第一个重要中间体)的代谢途径.方法利用PCR方法克隆编码大肠杆菌1-脱氧-5-磷酸木酮糖(D-1-deoxyxylulose 5-phosphate,DXP)合酶和异戊烯二磷酸异构酶(isopentenyldiphosphate isomerase,IDI)的基因,以及编码辣椒(Capsicum annuum)牻牛儿基牻牛儿基二磷酸(geranylgeranyl diphosphate,GGDP)合酶的基因.分别构建含DXP合酶基因的表达载体pSLB208/DXP和含GGDP合酶与IDI异构酶基因的融合表达载体pAIG.将含紫杉烯合酶的表达载体pETB3和本研究构建的这2个表达载体共转化大肠杆菌,诱导4个基因在大肠杆菌中共表达;并通过GC-MS分析大肠杆菌工程菌的代谢产物.结果在大肠杆菌中构建了一个合成紫杉烯的途径,通过GC-MS分析检测到紫杉烯的合成.结论利用代谢途径工程合成紫杉醇中间体是可行的,可为其他萜类化合物中间体代谢工程研究提供坚实的物质基础.
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一种快速连接及筛选重组阳性克隆的简便方法
目前，生命科学的各个领域已深入到分子生物学水平，在将外源基因向质粒载体的克隆过程中，常规方法操作的步骤繁琐，花费时间长，若忽略一些细小因素可导致克隆失败。本实验室在长期的分子克隆工作中，积累了一些经验，建立了一种快速连接及筛选重组阳性克隆的简便方法。我们以紫杉烯合酶(taxadiene synthase，TS)基因向真核表达载体pIGF2中的克隆为例，报告如下，以供在条件简易情况下的工作者参考使用。
