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晚期糖基化交联产物裂解剂文献资料
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晚期糖基化交联产物裂解剂酶联免疫吸附测定筛选方法的建立
目的建立一种快速、体外筛选晚期糖基化终产物(AGE)交联结构裂解剂的方法.方法以牛血清白蛋白(BSA)与葡萄糖孵育形成AGE-BSA,并与包被于96孔酶标板上的大鼠尾胶原蛋白交联制备AGE-BSA-胶原交联结构,药物作用一定时间后,采用以抗BSA为抗体的ELISA方法检测BSA残留量,以此评价裂解剂的裂解强度.并对ELISA全程条件进行了优化.结果 BSA与葡萄糖孵育3～4个月后,在Ex/Em(395/460 nm)下出现特异性荧光,SDS电泳显示68.0 ku的BSA已转化为分子量大于68.0 ku蛋白质,表明已形成AGE-BSA;AGE-BSA可与鼠尾胶原蛋白形成特异性的交联结构,强特异性结合的包被量为每孔0.01～0.1 μg.理想的封闭液为Pierce公司的SuperBlock封闭缓冲液.用新建立的ELISA方法对先导化合物苯基-4,5-二甲基噻唑氯嗡盐(ALT-711)及新合成10种裂解剂进行了体外裂解效应的评价,ALT-711结果与文献报道基本一致;本方法筛选的结果与高效液相以小分子二羰基化合物为底物的筛选方法结果趋势一致.结论此方法可用于体外筛选AGE交联裂解化合物,并具有高通量的特点.
关键词： 晚期糖基化交联产物裂解剂 药物筛选 酶联免疫吸附分析
