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桑黄多糖P1对肝癌HepG2细胞周期和钙调蛋白信号通路的影响
目的 探讨桑黄多糖P1抑制人源性肝癌HepG2细胞增殖的作用机制.方法 桑黄多糖P16.25～200 mg· L-1与HepG2细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率.桑黄多糖P1 100和200 mg· L-1与HepG2细胞作用48 h,流式细胞术检测细胞周期和凋亡;荧光分光光度法测定细胞内Ca2+浓度;实时荧光定量PCR检测细胞内钙调蛋白(CaM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)、K-ras和c-fos基因表达;Western蛋白质印迹法检测细胞内CaMKⅡ和Kras蛋白表达.结果 桑黄多糖P1对HepG2细胞存活的抑制率随药物浓度的增大而显著提高,100和200 mg·L-1时抑制率高达44.0％和61.3％.桑黄多糖P1 200 mg· L-1处理48h S期细胞百分含量明显升高,由对照组的(23.3±3.4)％升高至(37.8±2.2)％(P＜0.01),而G2/M期细胞百分含量明显降低,由对照组的(15.3±1.2)％降至(3.4±1.9)％(P＜0.01);细胞凋亡率无明显变化.与对照组相比,桑黄多糖P1 100和200 mg·L-1处理48 h后CaM,CaMKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos mRNA水平显著下降(P＜0.01);Western蛋白质印迹检测结果显示,桑黄多糖P1作用48 h后HepG2细胞内CaMK Ⅱ和K-ras蛋白水平与对照组相比显著下降(P＜0.01).桑黄多糖P1 200 mg·L-1处理细胞后,细胞内Ca2+荧光强度显著升高,0～20 min内分别由951增至1430(P＜0.01),而对照组一直维持在1 150左右.结论 桑黄多糖P1可能通过提高细胞内Ca2+浓度以及下调CaM,CaMKⅡ,EGF,EGFR,K-ras和c-fos基因的表达,诱导HepG2细胞S期阻滞,从而抑制HepG2细胞增殖.
