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Liguzinediol的正性肌力作用机制及心脏安全性
目的 探索Liguzinediol (LZDO)对正常大鼠离体心脏正性肌力作用的机制,并评价英心脏安全性.方法 ①大鼠离体心脏实验:按照灌流液(空白对照)→LZDO 100 μmol·L-1→洗脱的顺序灌流,持续5 min并于灌流5 min末记录大鼠离体心脏左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室内压大上升/降速率(±dp/dtmax)及心率(HR).②豚鼠在体和离体实验:在体实验 按照生理盐水→LZDO1.7 g·kg-1 的顺序经颈外静脉缓慢推注,持续5 min,于每次处理后5min记录5只豚鼠心电图.离体实验 按照灌流液(空白对照)→LZDO 300 μmol·L-1的顺序灌流,持续5 min,于灌流5min末记录豚鼠离体心脏心电图.分析P-R间期和心率校正QT间期(QTc间期).③膜片钳全细胞法记录细胞膜离子通道电流:按照灌流液(空白对照)→尼莫地平2μmol·L-1顺序灌流左心室肌细胞,记录电流.灌流液(空白对照)→LZDO 100μmol·L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录其5个细胞的L型钙电流.另两组实验按照灌流液(空白对照)→LZDO 1→10→100→300 μmol·L-1的顺序灌流,于灌流5 min末记录hNav1.5和hERG电流.④激光共聚焦方法测定左心室心肌细胞的钙释放量:按照灌流液(空白对照))→LZDO 100 μmol·L-1的顺序灌流,于灌流2 min和30 min末记录心肌细胞钙释放量.结果 ①大鼠离体心脏实验:尼莫地平1μmol· L-1和rethenium red 5 μmol·L-1均能完全阻断LZDO 100 μmol·L-1的正性肌力作用.②豚鼠在体和离体心电图实验:豚鼠在体给予LZDO 1.7 g·kg-1或豚鼠离体心脏灌流LZDO 300 μmol·L-1后,P-R及QTc间期并没有显著性改变.③细胞膜离子通道电流实验:LZDO 100 μmol·L-1未能显著地增加大鼠左心室肌细胞的L型钙电流；LZDO 1,10,100和300 μmol·L-1未能显著地改变hNav1.5和hERG电流.④激光共聚焦测定左心室心肌细胞钙释放实验:LZDO 100μmol·L-1显著增加左心室心肌细胞钙释放,于2 min末钙释放量达到大值,并能维持到30 min (P＜0.05).结论 LZDO对L型钙通道无直接作用,LZDO是通过作用肌浆网钙释放来起到正性肌力作用的；LZDO在体1.7 g·kg-1或离体300 μmol· L-无致心律失常的作用.
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抗心律失常复方中药稳心颗粒的心脏安全性再评价
目的 整合在体、离体、细胞、分子多功能指标,观察抗心律失常复方中药稳心颗粒(WXKL)对大鼠心脏和豚鼠离体心脏心电图、心肌细胞表型及hERG离子通道电流作用,对心脏安全性再评价.方法 ①大鼠在体实验:WXKL72.9 g·kg-1剂量ig给予,连续7d,然后进行Ⅱ导联心电图记录.②豚鼠离体心脏实验:按照正常灌流液10 min,WXKL3×10-2 g·L-110 min顺序灌流,记录心电图.③高内涵细胞表型实验:H9C2心肌细胞加入WXKL1×10-2、1×10-3g·L-1 24h后,换成0.1 μmol·L-1Hoechst 33342、MitoTracker Deep Red FM 2种荧光分子探针作用20 min,再加入Rhod2 AM荧光分子探针作用30 min,进行活细胞成像.④全自动膜片钳Ionworks系统记录hERG通道电流实验:加入含有(1×10-2、l×10-2.5、1×101、1×10-3.4 g·L-1) WXKL的细胞外液,记录hERG通道电流,分析hERG通道活性Ix.结果①大鼠在体实验:与空白对照组比,WXKL72.9 g·kg-1及阳性药VER 3.6×10-2g·kg-1对P-R间期、QRS间期、QTs间期、心率差异无统计学意义.②豚鼠离体实验:与空白对照组相比,WXKL3×10-2 g·L-1组P-R间期、QRS间期、Q-T间期、心率并没有显著性差异,阳性药奎尼丁3.25×10-3g·L-1延长QRS间期、Q-T间期,减慢心率(P＜0.01),而P-R间期差异无统计学意义.③高内涵细胞表型实验:与空白对照组相比,各浓度WXKL对H9C2心肌细胞的数量、线粒体质量及细胞内钙流强度未显著性改变,而Ⅲ类抗心律失常阳性药胺碘酮在6.82×10-3 g·L-1剂量下则对H9C2心肌细胞有显著性改变损害.④全自动膜片钳Ionworks系统记录hERG通道电流实验:与空白对照组相比,各浓度的WXKL未显著性改变hERG通道电流,hERG通道活性没有差异,阳性药奎尼丁3.25×10-4g·L-1阻断hERG通道,抑制hERG通道活性(P＜0.01).结论 根据本研究首次建立的多指标综合评价方式,WXKL是一种对心脏较安全的抗心律失常复方中药.
