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UPLC/Q-TOF-MS法对凝血酶冻干粉中的蛋白组分进行鉴定和定量分析
目的:建立UPLC/Q-TOF-MS法鉴定市售凝血酶冻干粉中的蛋白组分并进行定量.方法:样品经胰蛋白酶消化后的多肽混合物,用超高效液相色谱进行分离,并在线进入ESI-Q-TOF-MS检测,获得的肽段一级母离子和碎片离子的高分辨准确质量数据(MSE方法),经ProteinLynx Global Server(PLGS 2.4)软件蛋白质谱库检索,确定其中的蛋白组分,再以Hi3非标记蛋白定量方法对各蛋白组分进行定量,得到质量百分比定量结果.结果:在以猪血为原料生产的26批凝血酶冻干粉中,鉴定出人血白蛋白和21种猪源蛋白,其中,有1家企业的3批样品中鉴定出猪和人血浆成分,其余23批次样品均为猪血浆成分;样品中的猪凝血酶含量在1.9％ ～43.7％之间.在以牛血为原料生产的3批凝血酶冻干粉中共鉴定出17种牛源蛋白;样品中的牛凝血酶含量在49.4％ ～77.6％之间.结论:UPLC/Q-TOF-MS法灵敏度高,选择性好,通过一次分析可对凝血酶冻干粉中蛋白组分同时进行定性和定量,并可获得有关工艺相关的数据信息如来源和种属等,可用于本品的工艺研究以及质量控制研究.该法可以作为同类生化药物质量研究和组分分析的方法.
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同位素标记相对和绝对定量蛋白组学技术筛选儿童哮喘不同病情控制水平血清差异蛋白
目的 从整体蛋白水平研究不同控制水平儿童哮喘患者血清的差异性蛋白,为防治儿童哮喘提供依据.方法 采用同位素标记相对和绝对定量标记结合二维液相色谱串联质谱定量蛋白组学技术筛选鉴定控制、部分控制和未控制儿童哮喘患者血清中差异表达蛋白,通过酶联免疫吸附测定法进行差异蛋白验证.结果 共鉴定蛋白260种,筛选出不同控制水平儿童哮喘间两两比较均有差异的蛋白57种(变化倍数＜0.8或变化倍数＞1.2),主要参与21种生物过程,主要具有8种分子功能类型,主要为17种细胞成分类型.酶联免疫吸附测定结果显示控制组的玻连蛋白含量(573.92±412.43)μg/ml高于未控制组的(382.27±238.64)μg/ml,差异有统计学意义(P =0.0399).结论 发现不同病情控制水平儿童哮喘患者血清中的差异性蛋白57种,这些差异蛋白可作为控制儿童哮喘的潜在生物学靶点.
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细胞培养稳定核素标记技术的发展与应用
细胞培养稳定核素标记(stable isotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC)技术是一种利用稳定核素标记细胞内蛋白并根据质谱丰度比率进行定量的体内代谢标记技术.结合不同的蛋白亲和富集方式,可以获得较高灵敏度和准确性的蛋白定量信息.本文综述了SILAC技术的发展历史、原理、特点以及应用,着重介绍了其在研究蛋白质与小分子间的相互作用、定量蛋白组学以及蛋白翻译后修饰等方面的应用进展.
关键词： 细胞培养稳定核素标记 亲和富集 质谱 定量蛋白组学
