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  • UPLC/Q-TOF-MS法对凝血酶冻干粉中的蛋白组分进行鉴定和定量分析

    作者:徐小玲;胡远华

    目的:建立UPLC/Q-TOF-MS法鉴定市售凝血酶冻干粉中的蛋白组分并进行定量.方法:样品经胰蛋白酶消化后的多肽混合物,用超高效液相色谱进行分离,并在线进入ESI-Q-TOF-MS检测,获得的肽段一级母离子和碎片离子的高分辨准确质量数据(MSE方法),经ProteinLynx Global Server(PLGS 2.4)软件蛋白质谱库检索,确定其中的蛋白组分,再以Hi3非标记蛋白定量方法对各蛋白组分进行定量,得到质量百分比定量结果.结果:在以猪血为原料生产的26批凝血酶冻干粉中,鉴定出人血白蛋白和21种猪源蛋白,其中,有1家企业的3批样品中鉴定出猪和人血浆成分,其余23批次样品均为猪血浆成分;样品中的猪凝血酶含量在1.9% ~43.7%之间.在以牛血为原料生产的3批凝血酶冻干粉中共鉴定出17种牛源蛋白;样品中的牛凝血酶含量在49.4% ~77.6%之间.结论:UPLC/Q-TOF-MS法灵敏度高,选择性好,通过一次分析可对凝血酶冻干粉中蛋白组分同时进行定性和定量,并可获得有关工艺相关的数据信息如来源和种属等,可用于本品的工艺研究以及质量控制研究.该法可以作为同类生化药物质量研究和组分分析的方法.

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