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银杏内酯B对oxLDL刺激大鼠胸主动脉平滑肌细胞和U937细胞功能变化的作用
目的观察银杏内酯B对oxLDL或PAF引起的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖及U937单核细胞趋化因子分泌的抑制作用.方法用3H-Tdr参入实验测定VSMC增殖.用ELISA和RT-PCR方法测定MCP-1和IL-8的蛋白和mRNA水平.Western blotting测定p65和IκB的蛋白量.放射受体配体结合实验观察oxLDL与PAF受体的结合.结果银杏内酯B呈剂量依赖性地抑制oxLDL诱导的VSMC增殖以及U937细胞MCP-1和IL-8分泌,并抑制oxLDL诱导的p65活化和IκB降解.并证实oxLDL可以抑制PAF与其在U937细胞上受体的结合.结论银杏内酯B在体外具有一定的抗oxLDL促进VSMC增殖及刺激单核细胞趋化因子分泌的作用.银杏内酯B抑制oxLDL的毒性作用可能部分通过抑制其与PAF受体的结合实现.
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MYOC基因C1009del突变对人小梁网细胞功能的影响
目的 探讨小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白(MYOC)基因C1009缺失突变(MYOC-C 1009del)对体外人小梁网细胞(HTMC)功能及核因子κB(NF-κB)通路的影响.方法 针对MYOC基因野生型及C1009del突变型分别构建慢病毒质粒载体pLVX-3FLAG-MYOC-EGFP(简称rLV-MYOC)和pLVX-3FLAG-MYOC-mut-EGFP(简称rLV-MYOC-mut).慢病毒质粒经包装和纯化后体外感染HTMC,以空白HTMC及感染空质粒病毒的HTMC作为2组空白对照,感染48 h后用于后续功能实验.采用流式细胞术检测HTMC的凋亡率及细胞周期;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测细胞存活情况;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测NF-κB及其抑制因子(IκB)的mRNA表达情况;采用免疫印迹法检测NF-κB和IκB的蛋白质表达水平.结果 与感染rLV-MYOC的HTMC相比,感染rLV-MYOC-mut的HTMC呈现细胞G1期缩短、S期延长(P＜0.05),而细胞凋亡率和细胞存活率二者之间差异均无统计学意义(P＞0.05).感染rLV-MYOC-mut的HTMC的NF-κB mRNA和IκB mRNA表达水平均明显低于感染rLV-MYOC的HTMC(P＜0.05),而在蛋白质表达水平上,感染rLV-MYOC-mut的HTMC的NF-κB表达水平与感染rLV-MYOC的HTMC持平,而IκB的表达水平在感染rLV-MYOC-mut的HTMC中呈下降趋势(P＜0.05).结论 MYOC基因C1009del突变可通过影响HTMC周期,使细胞阻滞于S期,进而影响HTMC的正常功能.C1009del突变尽管可使IκB表达下调,但并不是通过活化NF-κB通路这个途径导致原发性开角型青光眼的发生.
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D-柠檬烯对酒精性脑损伤大鼠脑组织NF-κB、IκB 及 TNF-α表达的影响
目的：观察D-柠檬烯对酒精性脑损伤大鼠脑组织NF-κB、IκB及TNF-α表达的影响。方法60只Wist-ar大鼠随机分为6组，每组各10只。药物1、2、3组与模型组制作酒精性脑损伤模型，每日予50％乙醇灌胃，前2周为8 mL／（kg· d），后4周为12 mL／（kg· d），其中药物1、2、3组造模同时分别予100、200、400 mg／（kg· d）的D-柠檬烯灌胃；单纯药物组与空白对照组不制作动物模型，其中空白对照组每日予蒸馏水灌胃，单纯药物组在此基础上加400 mg／（ kg· d） D-柠檬烯灌胃。实验第6周末处死动物，留取脑组织，HE染色，镜下观察其形态结构变化；免疫组化法测定脑组织中的NF-κB、IκB蛋白；ELISA双抗夹心法检测脑匀浆中的TNF-α。结果模型组神经元数量减少，分布不规则，细胞核明显固缩变形，药物1、2、3组脑组织形态结构变化逐渐减轻。模型组NF-κB阳性细胞数、IκB阳性细胞数与空白对照组相比，P均＜0．05。药物1、2、3组NF-κB阳性细胞数减少、IκB阳性细胞数增多，与模型组相比，P均＜0．05；药物3组与药物1、2组相比，P均＜0．05。模型组大鼠脑匀浆中TNF-α表达高于空白对照组（P均＜0．05）；药物1、2、3组大鼠脑匀浆中TNF-α表达低于模型组（P均＜0．05），且药物3组低于药物1、2组（P均＜0．05）。结论 D-柠檬烯可降低酒精性脑损伤大鼠脑组织中NF-κB、TNF-α的表达，上调IκB的表达，进而减轻酒精性脑损伤。
