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核苷转运蛋白在细胞水平跨膜转运作用的研究进展
核苷类化疗药物是临床上常见的抗癌药,用于多种癌症的治疗.此类药物可通过细胞膜上的核苷转运蛋白进入细胞,为提高药物在肿瘤细胞中的浓度以达到抗癌效果,就需对核苷转运蛋白及其跨膜转运机制有充分的认识.本文对核苷转运蛋白在细胞水平的跨膜转运的研究进展作一综述.
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酸枣仁皂苷A对小鼠前额叶皮层腺苷释放及核苷转运体的影响
目的 研究酸枣仁皂苷A(JuA)(40、80 mg/kg)对小鼠前额叶皮层腺苷释放的影响.方法 采用在体脑微透析观测JuA对前额皮质细胞外腺苷含量的影响,并同时观察小鼠的自主活动;Western blot考察JuA对平衡型核苷转运蛋白(ENT)和浓度型核苷转运蛋白(CNT)2种蛋白质表达.结果 JuA腹腔注射能在90 min内剂量依赖性地增加小鼠前额叶皮层细胞外腺苷含量,并降低其自主活动.对CNT1和ENT1蛋白表达无显著性影响.结论 JuA可以促进小鼠前额叶皮层腺苷的释放,但可能与核苷酸转运蛋白无关.
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RNAi下调hENT1可增强5-氟尿嘧啶对胰腺癌细胞的毒性
目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞的毒性改变情况.方法:设计并合成能表达特异性针对hENT1的shRNA(small hairpin RNA)的DNA序列,构建pSilence-hENT1 4.1-CMV neo质粒.用脂质体法将pSilence-hENT1 4.1-CMV neo质粒转染胰腺癌Panc-1细胞,并以含G418(600 μg/mL)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1).RT-PCR检测下调pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1细胞hENT1 mRNA表达的效果及稳定性.MTT法检测细胞在含5-FU(0～1.56×106 nmol/L)的培养液中48 h后的生存率,并计算IC50.结果:测序显示重组质粒pSilence-hENT1 4.1-CMV neo中插入片段序列正确.RT-PCR结果显示,pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1细胞hENT1 mRNA表达水平下调,并在两个月内(共传代15次)保持相对稳定.MTT结果显示,pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1细胞组氟尿嘧啶的IC50显著下降,为Panc-1细胞组IC50的51.52 %(P《0.01).结论:用RNAi 方法下调hENT1 mRNA表达可增强5-FU对胰腺癌细胞的毒性.
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潘生丁抑制平衡型核苷转运蛋白对5氟尿嘧啶在胰腺癌细胞内浓聚的影响
目的:研究阻断平衡型核苷转运蛋白(ENTs)后对胰腺癌细胞膜转运5氟尿嘧啶(5-FU)能力的影响.方法:培养的PANC-1细胞分为ENTs阻断组和ENTs非阻断组,阻断组用潘生丁将ENTs阻断,非阻断组则未用潘生丁.两组培养基中均加入5-FU 100 μg/ml.温育15,30 min,1,2,4 h后细胞用橡皮刮取收集.取等量细胞刮取液2份各100 μl,一份用毛细管区带电泳测定细胞内5-FU总量、另一份用作平行样本测定总蛋白含量.根据平行样本细胞总蛋白来确定细胞数,再依细胞体积计算单细胞内药物浓度.结果:ENTs非阻断组细胞内5-FU浓度在15 min内上升较快,达66.99±10.16 pg/nl,为培养基中5-FU浓度的67%,30 min为83.75±5.333 pg/nl,1 h达高峰(92.86±1.604 pg/nl),为培养基中5-FU浓度的93%,以后处于平台.ENTs阻断组细胞内5-FU浓度上升较慢,15 min仅为ENTs非阻断组浓度的68.65%;30 min为ENTs非阻断组浓度的70.66 %;1 h达ENTs非阻断组的高浓度;但此后ENTs阻断组细胞内5-FU浓度仍继续升高,2 h达138.3±9.769 pg/nl,为ENTs非阻断组的1.64倍(P<0.01).结果提示,完全阻断ENTs后早期细胞内5-FU浓度上升较慢,但随着细胞在5-FU内暴露时间延长,5-FU在细胞内浓聚作用明显.结论:阻断胰腺癌细胞膜上ENTs核苷转运蛋白可增加5-FU在细胞内的浓聚.
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核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系
背景与目的 核苷转运蛋白介导的核苷跨膜转运在调节细胞功能中发挥重要作用,可能是某些肿瘤的候选易感基因.本研究旨在探讨核苷转运蛋白基因ENT3单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系.方法 采用病例对照研究,收集2008年5月-2009年5月于上海市肺科医院就诊的原发性肺癌患者351例和同期住院的非肿瘤患者207例,应用AllGloTM探针结合实时荧光PCR方法分析肺癌组和对照组ENT3基因rs10999776多态位点的基因型分布情况,比较不同基因型与肺癌易感性的关系以及不同基因型联合吸烟对肺癌易感性的影响.肺癌组与对照组基因型和等位基因分布比较用χ2检验,以调整比值比及95%CI表示相对危险度,所有统计检验均为双侧概率检验,所有资料均用SPSS软件进行统计.结果 肺癌患者rs10999776多态位点的CC、TC、TT基因型和C、T等位基因频率分布与对照组比较无统计学差异(P>0.05).与非吸烟的野生型纯合子个体比较,携带突变等位基因T(TC+TT)的吸烟个体罹患肺癌的风险性明显增加,且吸烟≥30包/年者风险性更高,调整OR值分别为2.848(95%CI: 1.536-4.879,P=0.005)、3.076(95%CI: 2.308-6.741, P=0.001).而对肺癌不同组织类型的分析发现,三种基因型的吸烟个体罹患肺鳞癌的风险性均增加,且携带突变等位基因T的个体风险性更高,调整OR值为6.066(95%CI: 2.884-12.758,P<0.001).而rs10999776(C>T)多态性联合吸烟对肺腺癌则无显著影响.结论 核苷转运蛋白基因ENT3rs10999776多态性可能与肺鳞癌的发病风险相关,且与吸烟环境暴露存在一定的相互作用.
