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X射线全身照射诱导小鼠胸腺Egr-1和Egr-4基因表达水平的实时定量RT-PCR分析
目的 应用实时定量RT-PCR技术检测X射线伞身照射诱导小鼠胸腺Egr-1和Egr-4基因的表达变化.方法 小鼠接受X射线全身照射后4和24 h,提取胸腺mRNA,以GAPDH作为内参基因,利用实时定量RT-PeR检测方法,探讨Egr-1和Egr-4基因的相对表达量与不同照射剂量之间的关系.同时计数骨髓嗜多染红细胞微核率作为辐射生物剂量参照.结果 Egr-l和Egr-4基因表达量在0.5～6 Gy全身照射后4和24 h均与照射剂量之间存在显著的相关性(r=0.974,0.987,0.978,0.999,P<0.01),其剂量效应曲线可拟合成线性平方方程.各剂量点Egr-1和Egr-4基因表达量与骨髓嗜多染红细胞微核率高度相关(r=0.866、0.947、0.983、0.835,P<0.05).进一步分析表明,照射后4 h Egr-4基因表达不仅剂量效应关系良好,且增幅为明显,并与骨髓嗜多染红细胞微核率的剂量效应曲线相平行.结论 实时定量RT-PCR技术检测Egr-4基因的早期表达有可能成为建立大批量、快速辐射生物剂量估算方法的候选者.
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大黄素抑制脂多糖诱导星形胶质细胞炎症反应的机制研究
目的 探讨大黄素对脂多糖(LPS)诱导大鼠星形胶质细胞炎症反应的抗炎作用及其机制.方法 健康成年♀、♂SD大鼠合笼交配,取出生24 h内的乳鼠脑组织(皮层)消化为细胞后,于细胞培养箱内培养10～14 d,纯化、分离出星形胶质细胞,并将其分为正常组、正常给药对照组、模型组、给药组,使用LPS(100 μg·L-1)造模24 h,并给予大黄素(10μmol·L-1),采用NO测定试剂盒检测上清液中NO的释放量;qPCR技术检测原代星形胶质细胞CD14、C3的表达;Western blot技术检测原代星形胶质细胞C3、Egr-4的表达.结果 与正常组相比,模型组CD14、C3 mRNA表达升高(p＜0.01),C3蛋白表达升高(P＜0.05),Egr-4蛋白表达升高(P＜0.01);与模型组相比,给药组CD14 mRNA表达降低(P＜0.01),C3 mRNA及蛋白表达降低(P＜0.05),Egr-4蛋白表达降低(P＜0.01).结论 大黄素在星形胶质细胞LPS诱导的炎症损伤中,可明显降低其受体CD14及补体C3、Egr-4的表达,其抗炎作用可能与下调CD14表达,抑制LPS-LBP-CD14三联复合物形成,调控C3、Egr-4表达有关.
