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氡染毒小鼠肺及支气管组织的基因表达
目的 构建氡染毒小鼠肺及支气管组织差异表达基因的cDNA文库,并对其进行初步鉴定和同源性分析.方法 采用SR-NIM02型氡室对小鼠进行吸入染毒后,常规饲养3个月,分别提取和纯化染毒组(30工作水平月,WLM)与对照组(0.02 WLM)小鼠的肺及支气管组织的总RNA,采用Super SMART技术和抑制性差减杂交技术(SSH),构建氡染毒后肺及支气管组织的正、反向差减杂交的cDNA文库;常规连接pGEM-T-easy载体,转化DH5α感受态细胞,巢式PCR鉴定;对阳性克隆测序,并与GeneBank数据库进行BLAST同源性比对,进行初步功能分类.结果 共获得克隆460个,其中含有插入片段的克隆146个,经BLAST同源性比对后有48个正向差减cDNA片段与61个反向差减cDNA片段与GeneBank中的序列有不同程度的同源性.结论 成功构建了氡染毒小鼠肺支气管差异表达cDNA文库,染毒后小鼠肺及支气管组织中某些基因会发生差异表达,其中部分基因可能参与细胞凋亡和周期调控、机体免疫调节及细胞间信号传导等过程.
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两个标准化cDNA差减文库的构建
目的构建2个标准化cDNA差减文库.方法以淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系为Tester、敏感性品系为Driver,进行正向抑制性差减杂交;以敏感品系为Tester、抗性品系为Driver,进行反向抑制性差减杂交.分别将获取的2组抑制性差减杂交产物克隆入质粒表达载体(PinPointTM Xa-1T-Vector),并以PCR扩增鉴定插入片段.结果获得2个标准化cDNA差减文库,其中抗性相关基因(抗性品系高表达或特异表达)文库含523个重组子,敏感相关基因(敏感品系高表达或特异表达)文库含286个重组子.插入片段大小平均约360 bp.结论所建的2个差减文库适合做进一步研究.
