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细菌的细胞程序性死亡中毒素-抗毒素系统的研究进展
与哺乳动物细胞相同,细菌也存在着细胞程序性死亡.本文对细菌中存在的细胞程序性死亡现象、引发细菌造成细胞程序性死亡的毒素-抗毒素系统的组成、分类、意义以及影响细胞程序性死亡的因素进行了介绍.
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结核分枝杆菌毒素蛋白 higB 的原核表达及分析
目的：克隆编码结核分枝杆菌毒素基因higB并在大肠杆菌中表达。方法利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增higB基因；构建重组表达质粒pET-32a（＋）-higB；筛选出阳性重组质粒后转化大肠杆菌，诱导目的蛋白表达；利用SDS-PAGE与Western-blot鉴定目的蛋白的表达。结果成功扩增出了higB基因，克隆于载体pET-32 a（＋）质粒中，PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆，测序证实正确；转化大肠杆菌BL21后higB蛋白没有发生表达。结论已成功构建结核分枝杆菌毒素基因higB的原核表达载体，但大肠杆菌BL21不能表达出higB蛋白。
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结核分枝杆菌抗毒素higA的原核表达及多克隆抗体制备
目的 克隆编码结核分枝杆菌抗毒素基因higA并在大肠杆菌中表达,纯化higA蛋白后,制备兔抗higA的多克隆抗体.方法 利用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组扩增higA基因;构建重组表达质粒pET-32a(+)-higA;筛选出阳性重组质粒后,转化大肠杆菌BL21,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达;利用SDS-PAGE与Western blot法鉴定目的蛋白的表达;以纯化的higA蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗higA的多克隆抗体并进行效价及特异性鉴定.结果 成功扩增出了higA基因,克隆于载体pET-32a(+)质粒中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确;转化大肠杆菌BL21后能成功诱导higA蛋白[相对分子质量(Mr)36 630]的表达;利用纯化的higA蛋白免疫新西兰大白兔后,能有效地刺激特异性higA抗体的产生,抗体的效价达到1∶3200以上.结论 成功在大肠杆菌中表达出higA蛋白,并制备出效价及特异性良好的兔抗higA多克隆抗体.
