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人ω干扰素在巴斯德毕赤酵母中的表达及纯化
目的:在巴斯德毕赤酵母中表达及纯化人ω干扰素(interferon ω, IFN-ω)以对其功能进行深入研究.方法:用PCR方法扩增人IFN-ω基因,与分泌型酵母表达载体pMEX9K重组,经酶切、PCR和序列测定证实重组表达载体pMEX9Kω构建正确.将重组载体pMEX9Kω用SalⅠ酶切后,转化毕赤酵母GS115.得到的转化子经诱导表达后在发酵上清中有人IFN-ω的表达,表达量为4×109 U/L.经过 Butyl Sepharose 4 FF疏水层析柱,SP Sepharose FF离子交换柱和Superdex 75凝胶过滤三步层析纯化,利用反相HPLC分析纯化的重组蛋白.结果:得到了纯度>99% 的重组IFN-ω.N端氨基酸序列测定表明重组人IFN-ω具有正确的N端氨基酸残基顺序,相对分子质量为22 000,并具有同天然蛋白相似的比活性.结论:在毕赤酵母中成功地表达并纯化得到了同天然蛋白具有相似的比活性的人IFN-ω.
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为抗"非典"专利导航--访国家知识产权局化学发明一部部长张清奎
4月19日,在军事医学科学院微生物流行病研究所P3实验室里,令人激动的实验结果显示:ω干扰素对预防"非典"有效.他们即着手做专利申请的准备.
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人ω干扰素基因工程菌发酵条件的优化
目的对表达人ω干扰素(interferon ω,IFN-ω)的巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化,确定佳的发酵控制条件以获得ω干扰素的高表达量.方法设计三因素三水平正交实验方案,用直观分析法分析来确定出佳的发酵条件.结果用FBS培养基发酵的佳条件是:温度28℃,溶氧50%,甲醇浓度1%,pH 7.0.结论通过发酵条件优化后,ω干扰素表达量达到了90mg·L-1.