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CPNE5对NF-κB转录调控活性的影响
目的:研究CPNE5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制.方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-CPNE5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞免疫荧光技术检测CPNE5表达上调对NF-κB入核的影响;凝胶阻滞实验研究CPNE5表达上调对NF-κB DNA结合能力的影响.结果:CPNE5可以显著抑制TNF-α对NF-κB的转录激活活性(P<0.0001);CPNE5不影响TNF-α诱导的NF-κB(P65)入核;CPEN5过表达降低了TNF-α诱导的NF-κB与DNA结合的能力.结论:CPNE5通过抑制NF-κB的DNA结合活性抑制TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性.
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CPNE5的A结构域对肿瘤坏死因子α诱导核因子κB活化的影响
[目的]研究CPNE5的A结构域(AD)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子κB(NF-κB)转录活性的调控作用.[方法]用PCR法扩增AD序列,将其构建EGFP-N1载体上,在真核细胞中表达融合蛋白AD-GFP.以连有κB序列和表达水平受κB序列调控的荧光素酶基因的质粒为报告基因载体,将EGFP-N1、AD-GFP质粒分别与报告基因共转染到HEK293细胞中.经TNF-α处理后.用双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶的活性,检测它们对NF-κB转录活性的影响.[结果]构建了AD-GFP质粒;A结构域能够显著抑制NF-κB转录活性(P<0.05);AD对NF-κB转录活性的抑制具有剂量依赖性.[结论]CPNE5的A结构域能够剂依赖性抑制NF-κB的转录激活活性.
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Cpne5蛋白在新生及成年小鼠各组织及其在不同胎龄胎鼠脑组织中的表达
目的:检测小鼠Cpne5蛋白在脑发育过程及不同组织中的表达水平,为Cpne5基因的功能研究提供线索.方法:提取新生、成年小鼠多种组织蛋白及11.5,12.5,13.5,14.5,15.5,17.5 d胎鼠脑组织蛋白,用免疫印迹法检测Cpne5蛋白表达量.结果:Cpne5蛋白表达于新生4d小鼠的全部受检组织,大、小脑表达量少,眼和肺的表达量高.成年小鼠检测结果相似,Cpne5蛋白的组织分布广泛,但脑组织含量低,表达量以卵巢、睾丸为高,其次为肺和心脏.胎脑的Cpne5蛋白表达量在胎鼠11.5、12.5 d较高,13.5 d降低,14.5至17.5 d再次升高,出生后又降低.结论:Cpne5蛋白在新生和成年小鼠广泛表达于各种受检组织,脑组织表达量低;小鼠胎脑发育过程中Cpne5蛋白表达呈现先高后低,再升高再降低的变化趋势.
