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单倍体HBV表达系统文献资料
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不同基因型HBx对乙型肝炎病毒复制的影响
目的 探讨A、B、C和D四个基因型乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响.方法 构建含A、B、C和D四种基因型HBx的真核表达载体和提前终止HBx表达的突变型单倍体HBV表达系统,共转染至人肝肿瘤细胞系HepG2细胞,利用荧光素酶报告系统检测不同基因型HBx对HBV 核心启动子的激活作用,利用酶联免疫法(ELISA)检测培养上清中HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的表达情况,利用特异性引物PCR方法检测细胞中HBV前基因组RNA(pgRNA)和总RNA(pgRNA,2.2 kb和0.8 kb RNA)的转录情况.结果 A、B、C和D四种基因型HBx的表达均可显著激活HBV核心启动子活性,但不同基因型HBx的激活作用不同.除C基因型外,A、B和D三种基因型HBx均可显著增强HBsAg和HBeAg的胞外分泌水平.检测HBV复制中间产物发现,C基因型HBx 对HBV pgRNA和总RNA转录水平的影响显著低于A、B和D基因型.结论 不同基因型HBx对HBV复制的影响不同,为进一步研究HBV基因型与HBV复制能力以及临床病理表现的关系打下基础.
关键词： 乙型肝炎病毒X蛋白 病毒复制 基因型 单倍体HBV表达系统
