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运用组织芯片检测淋巴瘤中活化的细胞毒性细胞的意义
目的运用组织芯片及常规技术检测活化的细胞毒性细胞在各型淋巴瘤中的表达分布情况,为临床治疗和判断预后提供依据.方法运用免疫组织化学方法检测以60例淋巴瘤标本制成的淋巴瘤组织芯片中穿孔素、颗粒酶B的表达和分布情况;同时选择10例鼻NK/T细胞淋巴瘤常规标本与组织芯片进行比较研究,10例淋巴组织反应性增生作为对照.结果在60例淋巴瘤制成的组织芯片中,发生在淋巴结内者48例,淋巴结外者12例.B细胞淋巴瘤42例,T细胞淋巴瘤16例,2例霍奇金淋巴瘤.42例B细胞淋巴瘤的瘤细胞均不表达穿孔素和颗粒酶B.10例外周T细胞淋巴瘤中8例表达穿孔素和9例表达颗粒酶B,阳性表达细胞均为非肿瘤细胞.芯片中的2例和常规10例鼻NK/T细胞淋巴瘤中均见穿孔素和颗粒酶B过度表达.T、B细胞淋巴瘤与NK/T细胞淋巴瘤比较有显著性差异(P<0.01).结论穿孔素和颗粒酶B是鉴定活化的细胞毒性细胞的免疫标志物,可作为NK/T细胞淋巴瘤的诊断性标志物;其在T细胞淋巴瘤中的表达反映了机体存在抗肿瘤的免疫反应机制.组织芯片技术具有高信息量、简捷、高效、实验误差小、重复性好等优点,可作为研究淋巴瘤的有用工具.
关键词： 淋巴瘤 组织芯片 免疫组织化学 perforin granzyme B -
人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用
目的观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用. 方法用RT-PCR法获取人granzymeB全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段PE转膜肽序列融合.将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)共表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞.用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达,荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构.结果成功地获得了野生型granzyme BcDNA及其融合蛋白基因,并构建了融合蛋白基因与GFP基因共表达的真核载体.转染HeLa细胞后,检测到目的蛋白的表达.荧光显微镜观察转染细胞有两种变化:一种表现为体积增大并常伴随多核现象;另一种出现细胞质和细胞核的固缩.电镜观察显示,多核巨细胞生长状态良好,固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征.结论 granzymeB融合蛋白在HeLa细胞中异位表达,可使转染细胞的形态发生变化,出现多核的大细胞和核固缩的小细胞.
关键词： granzyme B 融合蛋白 Hela细胞 表达 -
人granzyme B基因在HeLa细胞中的表达
目的构建携带人granzyme B基因的真核表达载体,并将其在HeLa细胞中表达. 方法用反转录PCR获取人granzyme B全长cDNA序列,将其活性型序列克隆进pcDNA3重组表达质粒. 脂质体法转染HeLa细胞,间接免疫荧光检测目的蛋白表达,HE染色观察其对转染HeLa细胞形态的影响. 结果成功获得了野生型granzyme B cDNA,构建了编码活性型granzyme B的真核表达载体pcDNA3-G. 转染HeLa细胞后观察到目的蛋白表达,转染细胞形态发生变化,出现多核大细胞及固缩小细胞. 结论活性型granzyme B哺乳动物表达系统的建立,为进一步研究granzyme B的生物学效应奠定了基础.
关键词： granzyme B 基因表达 Hela细胞
