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靶向序列捕获联合高通量测序检测先天性眼外肌纤维化的致病基因突变
目的 对中国人先天性眼外肌纤维化(CFEOM)家系和散发个体进行致病基因突变筛查.设计 实验研究.研究对象6个CFEOM家系和4个CFEOM散发个体.方法 收集CFEOM患者的临床及眼运动神经MRI检查资料,采集患者及家庭成员外周静脉血,提取基因组DNA,应用目标序列捕获联合高通量测序的方法对11个疾病候选基因进行全部外显子的突变筛查.生物信息学分析得到候选基因碱基改变后,在100个无关正常对照人群中进行PCR和Ssnger测序验证并对基因型和表型特征进行分析.主要指标 基因序列.结果 80％ (8/10)CFEOM先证者存在KIF21A基因突变,分别为c.2860C＞T(p.R954W)和c.2861G＞A(p.R954Q);20％(2/10)先证者存在TUBB3基因突变,分别为c.784C＞T (p.R262C)和c.1138C＞T (p.R380C).所有突变在家系正常个体及正常对照人群中均未检测到.携带KIF21A基因突变的患者表现为CFEOM1A和CFEOM3B表型,而携带TUBB3基因突变的患者表现出CFEOM3A表型.结论 KIF21A基因突变是中国人CFEOM的常见致病原因.高通量基因筛查可快速、准确地协助疾病的临床诊断和基因分型.
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两个中国籍先天性眼外肌纤维化家系基因定位与临床分型
目的 通过候选基因法对2个中国籍先天性眼外肌纤维化(congenital fibrosis of the extraocular muscles,CFEOM)家系进行致病基因定位及疾病分型.方法 对2个CFEOM家系所有成员均采集病史、体格检查、抽取外周静脉血5～8mL并提取基因组DNA.选择KIF21A第2、8、20、21外显子;PHOX2A/ARIX第1、2、3外显子;TUBB2B第1、2、3、4外显子;TUBB3第1、2、3、4外显子区域进行PCR引物合成并将扩增样品进行纯化测序,结果应用Chromas 2.3及DNAman 7.0软件进行序列比对分析.结果 家系1五代中9人患病,均具有典型CFEOM外观特征.致病基因位于KIF21A基因外显子21,2860C＞T.家系2四代中4人患病,除1人临床表型不典型外,其他3人都具有典型的CFEOM外观特征.致病基因位于TUBB3基因外显子4,1249G＞A.结论 运用候选基因法可快捷、有效地确定遗传性疾病家系的致病基因.家系1属于CFEOM 1A型,为常染色体完全外显的显性遗传;家系2属于CFEOM 3A型,为常染色体不完全外显的显性遗传.
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先天性眼外肌纤维化综合征Ⅰ型一家系KIF21A基因突变分析
目的 研究一个先天性眼外肌纤维化综合征Ⅰ型(congenital fibrosis of the extraocular muscles type 1,CFEOM1)家系KIF2lA基因第20、21外显子突变与疾病的关系.方法 收集CFEOM1 一家系共计8个成员,采用测序和等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)方法分别对先证者及家系成员KIF21A第20、21外显子热点突变c.2860C＞T进行分析.选择KIF21A基因两侧4个STR位点(D12S1668、D12S2194、D12S331和D12S1048)进行单倍型分析.结果 先证者和其他两例患者均存在KIF21A c.2860C＞T突变,家系中表型正常的成员均未检出该突变.单倍型分析结果显示该家系突变来源于母源性生殖腺嵌合体.结论 KIF21A基因突变c.2860 C＞T是该CFEOM1家系的致病突变.
