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非洲爪蟾晶状体再生过程中Pax6与Six3的表达
目的 检测晶状体诱导基因Pax6和Six3在晶状体摘除术后再生过程中的表达,探讨这两种基因与晶状体蛋白表达及细胞纤维化的关系.设计实验研究.研究对象48～53期非洲爪蟾蝌蚪.方法 实验组:选取发育正常的蝌蚪对其单侧的眼施以晶状体摘除手术;对照组:未做手术的另一侧正常眼.采用免疫荧光、蛋白印迹、qRT-PCR检测再生晶状体的眼睛中Pax6、Six3的表达情况.主要指标Pax6、Six3蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,晶状体被摘除后随着时间推移逐渐再生.术后0～3天Pax6与Six3表达上升;术后3～14天,Pax6的表达先升高后降低,Six3表达下降,晶状体囊形成;术后14～21天,Pax6的表达持续降低,Six3的表达升高;术后21～30天,Pax6与Six3的表达下降,晶状体结构日趋完整.结论 晶状体再生的关键事件是部分角膜细胞去分化和晶状体蛋白表达.再生早期在Pax6和Six3的共同作用下外角膜内层细胞转分化形成晶状体囊,这两种基因也与后期晶状体蛋白表达及细胞纤维化的调控有密切关联.
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视网膜发育基因Six3表达载体的构建
目的:Six3在视网膜发育中起着关键性的调节作用,然而商品化的Six3 表达载体尚鲜见,本研究拟以 pBaBb-puro为骨架,构建Six3真核表达载体.方法:以新生乳鼠眼 cDNA 为模板,通过 PCR扩增出Six3 编码序列,经酶切后,用T4 DNA连接酶将其与pBaBb-puro进行连接,经过转化、筛选后,进行酶切和测序鉴定.结果:经RT-PCR 扩增获得了含1002bp的Six3基因编码序列,经过酶切、连接、转化后,挑选 12 个菌落进行PCR检测,筛查到9个菌落含有重组质粒,对其中2个菌落进一步行酶切和测序鉴定,结果与理论预期完全相符.结论:成功构建了pBaBb-puro-Six3 真核表达载体,为进一步研究 Six3 的功能奠定了基础.
关键词： Six3 视网膜 pBaBb-puro 表达载体 鼠
