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氧化耗能文献资料
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AIF基因的能量代谢功能分析
目的：量化AIF基因在细胞能量代谢中的功能特性，探讨该基因相关听神经病的分子致病机制。方法选择第三代基因编辑工具CRISPR-Cas9技术结合阳离子脂质体转染技术，快速实现对HELA细胞的AIF基因进行敲除，并通过Western blot进行蛋白表达分析，Sanger测序进行基因型的分析，然后利用Oxygraph-2K对多个AIF基因敲除细胞系以及野生型细胞系进行氧化供能的检测，后采用GraphPad prism5.00进行数据分析。结果通过该方法获得了多株AIF基因敲除细胞系，并发现野生型细胞系耗氧功能明显强于AIF基因敲除细胞系。结论通过CRISPR-Cas9技术的应用，本研究快速实现了AIF蛋白表达缺失细胞系和野生型细胞系在氧化呼吸方面的差异比较，间接量化了该基因缺失所导致的能量损失，能量供应障碍可能是听神经病的致病机制之一。
关键词： AIF基因 听神经病 CRISPR-Cas9 基因敲除 氧化耗能
