您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)文献资料
-
运用实时荧光定量RT-PCR和ELISA方法定量检测SHIV的对比分析
目的 建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA载量检测方法,通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法.方法 体外转录制备RNA标准品,利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒的反应体系和针对SHIV gag保守区91个碱基的TaqMan探针与引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR.三种SHIV感染性分子克隆体外转染293T细胞,在不同的时间点采样,通过实时荧光定量RT-PCR和ELISA两种方法监测SHIV病毒复制过程.结果 两种方法监测的病毒复制过程基本一致,转染后2～48小时病毒复制出现明显的对数生长期,之后进入平台期,p24浓度大约103pg/ml,而RNA载量大约在108拷贝/ml.两者具有很好的相关性(r2＝0.834;P0.001).实时荧光定量RT-PCR灵敏度更高,检测范围更广,费用更低.结论 所建立的一步法检测SHIV病毒载量的实时荧光定量RT-PCR方法,可以作为监测SHIV体外扩增的常用方法.
