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人hDlg蛋白PDZ结构域的克隆及原核表达与纯化
目的 探讨人果蝇肿瘤抑制蛋白hDlg的PDZ结构域在大肠杆菌中的表达与纯化.方法 从HeLa细胞中设计引物克隆含有hDlg PDZ cDNA片段后进行第二轮扩增,并连接至T载体进行测序鉴定,EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后连接至pGEX-6p-l原核表达载体.转化BL21大肠杆菌后37℃诱导表达.结果 测序和双酶切鉴定hDlg的PDZ结构域被成功克隆至pGEX-6p-1原核表达载体.37℃诱导表达后,大部分GST-PDZ融合蛋白以包涵体的形式存在,部分存在于细菌裂解上清液中.16℃诱导表达后,无法检测到目的蛋白的表达.通过GST-beads结合的方式对细菌裂解液进行纯化,可溶性GST-PDZ的蛋白量可以显著提高.结论 通过GST-PDZ诱导表达,再通过GST-beads结合纯化的方式成功表达可溶性的hHlg PDZ结构域.
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hScrib和hDlg在上皮性卵巢癌的表达及意义
目的:探讨原发性上皮性卵巢癌中hScrib和hDlg的表达及意义.方法:用免疫组化SP法检测hScrib和hDlg蛋白在60例上皮性卵巢癌组织、18例卵巢交界性肿瘤、19例卵巢良性肿瘤及18例正常卵巢组织中的表达.结果:hScrib和hDlg蛋白在正常卵巢上皮的表达显著低于卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤以及上皮性卵巢癌,差异有统计学意义(P<0.05);hScrib和hDlg蛋白在不同卵巢组织中定位的改变较明显.二者在卵巢癌的表达呈正相关(P<0.05).结论:hScrib和hDlg蛋白可能通过定位的改变共同参与了卵巢癌的发生.
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非对称性分裂调节因子hScrib和hDlg与恶性肿瘤
肿瘤干细胞的鉴定成功对肿瘤发生的观点产生了新的挑战.干细胞大的特点是非对称性分裂从而实现自我更新,如果这一过程被扰乱则会发生肿瘤.肿瘤抑制基因hscrib、hdlg被认为在这一分子机制中调节命运决定子在子代细胞中的分配.细胞极性是上皮组织的一个标志性特点,极性丢失与上皮的恶性转化密切相关.研究表明hScrib、hDlg是维持正常上皮极性的关键因子,在多种上皮性恶性肿瘤的发生中可能起一定作用.
