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微小RNA-451抑制胶质瘤细胞侵袭能力的实验研究
目的 研究微小RNA-451(miR-451)通过调控基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达对LN229胶质瘤细胞株侵袭能力的影响.方法 体内、外实验均设立3组,分别为空白对照组、无义序列组和miR-451 mimics组.合成寡核苷酸miR-451 mimics转染LN229胶质瘤细胞以上调miR-451的表达,采用实时定量PCR检测转染后miR-451的表达,以Western blot方法检测各组MMP-2和MMP-9蛋白的表达,通过Transwell实验评估各组LN229胶质瘤细胞的侵袭能力.同时建立LN229细胞荷瘤裸鼠模型,绘制肿瘤生长曲线,并采用免疫组化方法检测各组肿瘤内MMP-2和MMP-9蛋白的表达.结果 PCR检测结果提示,与空白对照组、无义序列组相比,miR-451 mimics组miR-451的表达明显升高(均P ＜0.05).Western blot结果显示,miR-451 mimics组MMP-2的相对表达量(0.26±0.03)均低于空白对照组(0.67±0.03)和无义序列组(0.65±0.04)(均P＜0.05);miR-451 mimics组MMP-9的相对表达量(0.25±0.02)亦低于空白对照组(0.71±0.04)和无义序列组(0.73-±0.01)(均P＜0.05).Transwell实验结果显示,miR-451 mimics组穿过Transwell小室的细胞数为(41.0±2.9)个,低于空白对照组[(79.0±2.7)个]和无义序列组[(73.0±3.4)个](均P ＜0.05).体内实验结果表明,miR-451 mimics组的肿瘤体积[(697.31±65.25) mm3]明显小于空白对照组[(1 753.69±76.52) mm3]和无义序列组[(1 532.64-±65.31)mm3](均P＜0.05);免疫组化结果表明,与空白对照组和无义序列组相比,miR-451 mimics组肿瘤组织MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低(均P＜0.05).结论 miR-451通过调控MMP-2和MMP-9的表达抑制LN229胶质瘤细胞的侵袭性生长能力,可能为潜在的人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点.
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miRNA-451调控人脑胶质瘤细胞上皮-间质转化发生的机制研究
目的 研究miRNA-451过表达后通过靶标钙结合蛋白39(CAB39)调控人脑胶质瘤细胞上皮-间质转化发生的机制,以及miRNA-451过表达对胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 培养U251胶质瘤细胞,将其分为空白对照组、无义序列组以及miRNA-451 mimics处理组(简称miRNA-451组).采用实时定量PCR检测转染后U251细胞miRNA-451的表达;以Western blot法检测CAB39、E-钙黏素、N-钙黏素、波形蛋白、TWIST、人基质金属蛋白酶2(MMP-2)、人基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Snail、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达水平;通过细胞免疫荧光实验进一步验证N-钙黏素、波形蛋白的表达水平;采用划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化.结果 与空白对照组及无义序列组相比,miRNA-451组的miRNA-451相对表达水平明显升高(均P ＜0.05).Western blot结果显示,与空白对照组及无义序列组相比,miRNA-451组CAB39、N-钙黏素、波形蛋白、TWIST、MMP-2、MMP-9、Snail、P-AKT的表达水平降低(均P＜0.05),而E-钙黏素的表达水平升高(均P ＜0.05).细胞免疫荧光实验结果显示,miRNA-451组的N-钙黏素、波形蛋白的表达水平相对于空白对照组明显降低(均P ＜0.05).划痕操作后24 h、48 h miRNA-451组的划痕修复率与空白对照组及无义序列组相比均明显降低(均P＜0.05).转染48 h后miRNA-451组穿过滤膜的细胞数目与空白对照组及无义序列组相比显著减少(均P ＜0.05).结论 miRNA-451可能通过降低靶标CAB39的表达调控PI3K/AKT通路,抑制人脑胶质瘤细胞中上皮-间质转化现象的发生,从而抑制人脑胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力.
