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血脑/血瘤屏障体外模型的构建、形态与功能特性
目的构建并观测血脑/血瘤屏障体外模型的形态与功能特性,为中枢神经系统药物跨血脑和(或)血瘤屏障研究提供体外实验模型.方法将分离的Balb/C小鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)在铺有明胶的微孔膜上单层培养或与大鼠胶质瘤细胞C6双室共培养,分别建立血脑屏障(BBB)和血瘤屏障(BTB)模型,采用光镜和扫描电镜观察BMEC形态,采用Millicell-ERS系统检测屏障中的跨内皮电阻(TEERs),免疫细胞化学检测P-糖蛋白(P-gp)表达,并比较BBB和BTB中BMEC的形态和功能特征.结果两组模型中的BMEC均形成单层生长和良好的细胞间紧密连接,产生较高的TEERs值,并检测到P-gp表达.瘤细胞诱导使BMEC间出现间隙,同时相点TEERs值降低,P-gp表达减弱.结论两种体外模型可用于研究药物跨血脑和(或)血瘤屏障特性,其中BTB模型可能更适合抗肿瘤药物的研究.
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注射用血栓通对血脑屏障的通透性研究
目的 建立体外血脑屏障(BBB)模型,考察血栓通的主要活性成分(人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1及三七皂苷R1)的通透性.方法 选用小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3建立体外BBB模型.然后分为正常组和模型组,正常组培养6h,模型组缺氧6h后,均给予50 μg·mL-1血栓通0.2 mL.给药4h后,用高效液相色谱/质谱联用法测定各组的各有效成分的通透系数.结果 正常组中,人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re、三七皂苷R1的通透系数分别为(70.37 ±5.78)×10-8,(102.36±69.21)×10-9,(0.57 ±0.38)×10-9,(98.96±15.52)×10-9,(382.18±42.49)×10-9cm·s-1;模型组中,这5种活性成分的通透系数分别为(116.20±21.80)×10-8,(555.40±202.65)×10-9,(2.96±1.43)×10-9,(202.66±37.5)×10-9,(634.26±124.40)×10q em·s-1.与正常组相比,模型组的通透系数显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 血脑屏障缺氧6h后明显开放,注射用血栓通(冻干)可以透过血脑屏障发挥神经保护作用.
关键词： 注射用血栓通(冻干) 缺氧 血脑屏障 跨内皮电阻 -
辛伐他汀对不同氧供条件下大鼠脑微血管内皮细胞跨内皮电阻及MMP-9表达的影响
目的:观察在常氧、短暂缺氧、持续缺氧及复氧条件下,辛伐他汀对大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)跨内皮细胞电阻(TEER)及基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)表达的影响.方法:原代分离培养SD大鼠BMECs,随机分为常氧组、短暂缺氧组、持续缺氧组、复氧组,各组均实施辛伐他汀0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L 3种浓度预处理.观察各组细胞形态学及增殖活性变化;采用TEER评估各组通透性;免疫细胞荧光化学法测定MMP-9蛋白表达.结果:短暂缺氧、持续缺氧及复氧条件下大鼠BMECs 细胞受损逐渐加重,MMP-9表达逐渐增加,TEER 及细胞增殖活性逐渐下降.辛伐他汀干预能不同程度提高TEER并抑制MMP-9蛋白的表达,使细胞增殖活性提高.但这种抑制MMP-9的作用对短暂缺氧大鼠BMECs的TEER值及细胞增殖活性无显著改善.结论:辛伐他汀能通过抑制MMP-9蛋白的表达来提高持续缺氧及复氧条件下大鼠BMECs的TEER,而对短暂缺氧后TEER的改善作用不明显.
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药物实验血脑屏障体外模型的建立及评价
目的:建立模拟在体血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)模型并评价其形态和功能,为中枢神经系统药物的跨血脑屏障特性研究提供体外实验的模型依据.方法:将BALB/c小鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVEC)和大鼠C6胶质瘤细胞分别接种于经明胶包被的Transwell多聚碳酯膜内室和外室,进行非接触双室共培养,建立细胞培养水平的BBB模型,分别考察模型形成前后BBB光镜、扫描电镜和细胞的跨内皮电阻值(transendothelial electrical resistance,TEERs).结果:BMVEC培养至汇合后,扫描电镜显示细胞呈单层平铺生长并产生紧密连接.TEERs值较未形成屏障时明显升高(P＜0.05).结论:构建的BBB体外模型在形态学、跨内皮电阻和通透性方面具备了在体BBB的基本特性,适用于中枢神经系统药物跨BBB特性的研究.
