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miR-143通过靶向调控K-ras基因的表达抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖
目的：探讨miR?143靶向K?ras基因对宫颈癌细胞HeLa增殖的调控作用机制。方法选取宫颈癌细胞系HeLa，分别转染miR?143模拟物和模拟物对照，采用实时荧光PCR法检测HeLa细胞中miR?143的表达。将荧光素酶报告载体与miR?143模拟物共转染，采用荧光素酶活性实验验证miR?143对HeLa细胞的靶向作用。以miR?143模拟物、miR?143模拟物对照以及miR?143模拟物＋K?ras基因分别转染 HeLa 细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT ）法检测各组细胞的增殖活性，采用Western blot法检测各组细胞中K?ras蛋白的表达。选取5例人宫颈癌组织标本和宫颈上皮内瘤变组织样本，采用实时荧光PCR法检测miR?143的表达，采用Western blot法检测K?ras蛋白的表达。结果实时荧光PCR检测结果显示，转染miR?143模拟物组宫颈癌HeLa细胞中miR?143的表达水平为3．31±0．45，明显高于阴性对照组（0．97±0．22， P＜0．05）。双荧光素酶活性检测结果显示，miR?143模拟物可明显抑制野生型K?ras报告载体的荧光素酶活性，但对突变型K?ras 报告载体的荧光素酶活性并无明显的抑制作用。 MTT法检测结果显示，转染miR?143模拟物后，宫颈癌HeLa细胞的增殖活性较阴性对照组明显降低（ P＜0．05）；而转染miR?143模拟物＋K?ras基因后，宫颈癌HeLa细胞的增殖活性较单纯转染miR?143模拟物组明显提高（ P＜0．05），但仍明显低于阴性对照组（ P＜0．05）。 Western blot法检测结果显示，阴性对照组、miR?143模拟物组、miR?143模拟物＋K?ras组K?ras蛋白的表达水平分别为521．36±41．89、115．27±34．08和706．52±89．44，miR?143模拟物组K?ras蛋白的表达较阴性对照组明显降低（ P＜0．05）；miR?143模拟物＋K?ras组K?ras蛋白的表达较miR?143模拟物组和阴性对照组明显增高（P＜0．05）。实时荧光PCR检测结果显示，人宫颈癌组织中miR?143的表达水平（0．32±0．06）明显低于人宫颈上皮内瘤变组织（0．93±0．17， P＜0．05）；Western blot法检测结果显示，人宫颈癌组织中K?ras蛋白表达水平（584．39±72．34）明显高于人宫颈上皮内瘤变组织（114．23±25．82， P＜0．05）。结论在小样本宫颈癌组织中，miR?143呈现低表达，K?ras呈现高表达；而miR?143可通过靶向K?ras基因的表达抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。
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尿液miRNA143和miRNA133a在膀胱癌诊断中的应用
目的 探讨尿液中微小RNA143(miRNA143)、微小RNA133a(miRNA133a)相对表达量在膀胱癌诊断中的价值.方法 选取膀胱癌患者(膀胱癌组)50例、泌尿系统非肿瘤患者(疾病对照组)60例、体检健康者(正常对照组)60名.采用聚合酶链反应(PCR)检测膀胱癌组术前、术后及疾病对照组、正常对照组尿液miRNA143、miRNA133a的相对表达量.采用受试者工作特征(ROC)曲线评价尿液miRNA143和miRNA133a诊断膀胱癌的价值.结果 膀胱癌组术前尿液miRNA133a、miRNA143的相对表达量明显低于疾病对照组及正常对照组(P<0.05),而疾病对照组与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).膀胱癌组术后尿液miRNA143和miRNA133a的相对表达量均明显高于术前(P<0.05).不同TNM分期患者尿液miRNA143和miRNA133a的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05).ROC曲线分析显示,术前尿液miRNA143相对表达量诊断膀胱癌的佳临界值为≤0.165,曲线下面积(AUC)为0.827,敏感性为72.7％、特异性为80.8％;尿液miRNA133a相对表达量诊断膀胱癌的佳临界值为≤0.165,AUC为0.846,敏感性为75.0％、特异性为85.4％;二者联合检测的诊断性能无显著提高.结论 膀胱癌患者尿液miRNA143和miRNA133a呈低表达,其或许可作为辅助诊断膀胱癌的生物标志物.
