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靶向上皮特异性抗原阳性肝癌干细胞单克隆抗体联合顺铂治疗肝癌的实验研究
目的：探讨靶向肝癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗肝癌的疗效。方法采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定肝癌Bel7402?V3细胞中存在肿瘤干细胞。细胞免疫荧光法检测单克隆抗体15D2识别的抗原蛋白与PKH26阳性细胞及上皮特异性抗原（ ESA）在Bel7402?V3细胞中的表达情况。无血清悬浮培养法检测流式细胞术分选出的15D2阳性细胞的自我更新能力以及15D2对Bel7402?V3细胞自我更新能力的影响。 CCK8法检测15D2对细胞顺铂耐药能力的影响。裸鼠体内治疗实验分析15D2联合顺铂对Bel7402?V3移植瘤生长的抑制作用。结果Bel7402?V3细胞无血清悬浮培养11 d后形成的细胞球体中存在单个PKH26阳性细胞。细胞免疫荧光显示，单克隆抗体15D2识别的抗原分子能与PKH26和ESA在Bel7402?V3细胞上共定位。15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的体外成球率分别为（30．4±3．4）％和（8．8±1．8）％，差异有统计学意义（ P＜0．05）。15D2阳性细胞具有更高的顺铂耐药性，15D2阳性细胞和15D2阴性细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为1．014和0．365μmol／L。单克隆抗体15D2能够显著抑制Bel7402?V3细胞的无血清成球，抑制率为37．5％。经15D2处理后的Bel7402?V3细胞，顺铂耐药能力明显下降，其IC50为0．211μg／ml，而对照组的IC50为0．325μg／ml。抗体体内治疗实验结果显示，50、25、12．5 mg／kg 15D2组的肿瘤生长抑制率分别为82．6％、71．4％和60．0％，50 mg／kg 15D2＋顺铂组的肿瘤生长抑制率为91．0％，顺铂组的肿瘤生长抑制率为56．7％。结论单克隆抗体15D2是抗肝癌干细胞的功能性单克隆抗体，为肝癌干细胞靶向治疗的候选抗体药物。
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上皮特异性抗原和CD44蛋白在原发性结直肠癌组织中的表达及临床意义
目的：分析免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶（ SP）法测定原发性结直肠癌组织中上皮特异性抗原（ ESA）和CD44蛋白表达的关系及临床病理意义。方法选择2012年1月至2014年1月来中国医科大学附属盛京医院检查并确诊的结直肠癌患者52例（结直肠癌组），选择同期来院检查的正常结直肠黏膜组织患者20例（正常黏膜组）及伴不典型增生的结直肠腺瘤20例（不典型增生组），采用免疫组织化学SP法检测对三组ESA和CD44蛋白表达水平。结果在年龄＞50岁、肿瘤直径＞3 cm、浸润深度至浆膜及Dukes分期C＋D期的ESA阳性表达率高于年龄≤50岁、肿瘤直径≤3 cm、浸润深度累及肌层、Dukes分期A＋B者，差异有统计学意义（ P＜0．05）。有淋巴结转移、Dukes分期C＋D期CD44蛋白表达高于无淋巴结转移和Dukes分期A＋B者（ P＜0．05）。结论 ESA、CD44蛋白表达影响结直肠癌的发生发展，与浸润转移密切相关，在结直肠癌组织检测中同步检测ESA、CD44的蛋白表达，并分析其相关性，有助于结直肠癌的病理判断，在临床中具有一定的临床价值。
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杂交瘤单抗15B7靶向抑制ESA阳性肝癌干细胞的体外侵袭能力和顺铂耐药性
目的:研究一株杂交瘤细胞分泌的识别上皮特异性抗原(epithelial specific antigen,ESA)阳性肝癌干细胞的单克隆抗体(简称单抗)15B7的体外功能,为靶向肝癌干细胞的肝癌治疗提供候选抗体药物.方法:采用无血清悬浮培养及PKH26染色法确定肝癌Be17402-V3细胞球中存在肿瘤干细胞.采用FCM法和双色细胞免疫荧光法检测ESA和单抗15B7识别的抗原蛋白在Be17402-V3细胞中的表达情况.采用无血清悬浮培养法观察单抗15B7作用对Be17402-V3细胞球自我更新能力的影响,细胞计数试剂盒-8法检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞的顺铂耐药性的影响,Transwell实验检测单抗15B7对Bel7402-V3细胞侵袭能力的影响.结果:Be17402-V3细胞经无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26染色阳性的肿瘤干细胞.单抗15B7识别的抗原分子能与ESA一起共定位于Be17402-V3细胞.单抗15B7能显著抑制Be17402-V3细胞在无血清培养液中成球(P＜0.05),抑制率达32.4％;单抗15B7能够有效降低Be17402-V3细胞的顺铂耐药性(P＜0.05),实验组与未经单抗15B7处理的对照组半数抑制浓度分别为0.14μg/mL和0.27 μg/mL;此外,单抗15B7亦能抑制Be17402-V3细胞的侵袭能力(P＜0.05),抑制率达30.7％.结论:杂交瘤单抗15B7在体外能够显著抑制ESA阳性肝癌干细胞的自我更新、耐药和侵袭能力,推测其可作为肝癌干细胞靶向治疗的有价值的候选抗体药物.
