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5氮杂胞苷诱导NB细胞Caspase 8表达及对TRAIL敏感性的研究
目的:探讨5氮杂胞苷(5-Azacytidine)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞株SH-SY5Y凋亡的影响及其发生机制.方法:应用RT-PCR方法检测5氮杂胞苷作用前后SY5Y细胞Caspase 8的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、5氮杂胞苷+TRAIL、5氮杂胞苷+Caspase 8抑制剂+TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响.结果:SY5Y细胞不表达Caspase 8,5氮杂胞苷作用1、3和5d的SY5Y细胞Caspase 8表达逐渐增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经5氮杂胞苷诱导表达Caspase 8的 SY5Y 细胞对TRAIL敏感,并呈现一定的时间和剂量依赖性.联合用药组细胞凋亡率分别为(28.6±4.0)%、(38.5±4.2)%和(42.3±6.2)%,与单独用TRAIL组[(9.5±2.0)%、(10.7±1.8)%和(11.2±1.5)%]比较,差异有统计学意义,F值分别为41.131、45.014和49.405,P值均为0.000;Caspase 8抑制剂组细胞凋亡率分别为(11.8±2.0)%、(13.5±2.9)%和(15.1±3.4)%,与相应浓度的5氮杂胞苷+TRAIL组相比,细胞凋亡率明显降低,F值分别为41.131、45.014和49.405,P值均为0.000,说明Caspase 8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase 8的SY5Y细胞的杀伤作用.结论:5氮杂胞苷能增强SY5Y细胞对TRAIL的敏感性,其发生机制可能与Caspase 8表达上调有关.
关键词： 神经母细胞瘤 胞苷/药理学 肿瘤坏死因子 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 -
大鼠心脏成纤维细胞向心肌细胞分化的可行性研究
目的:通过观察5-氮胞苷诱导的体外培养大鼠心脏成纤维细胞(cardiacfibroblasts,CFs)中心肌特异性β肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)的表达,研究CFs向心肌细胞分化的可行性.方法:实验选用SD大鼠的乳鼠10只.胰酶消化、差速贴壁法体外分离腚培养大鼠CFs,分治疗组和对照组,前者用不同浓度5-氮胞苷(2.50,5,7.5,10.0,15.0,20 0 μmol/L)诱导,24 h后正常培养,以免疫组化、反转录多聚链合酶反应(RT-PCR)方法测定两组CFs β-MHC、连接蛋白43的表达. 结果:正常培养大鼠CFs呈梭形均匀生长,不表达β MHC和连接蛋白43.经5-氮胞苷诱导后,CFs体积缩小呈克隆样生长,表达β-MHC、连接蛋白43,以10 μmol/L浓度时明显.结论:5-氮胞苷诱导体外培养大鼠CFs表达心肌特异性β-MHC,与诱导浓度相关,提示可诱导大鼠CFs向心肌样细胞分化.
