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脂质抗氧化酶Peroxiredoxin 6对急性肺损伤的抗氧化保护作用
目的 确定脂质抗氧化酶Peroxiredoxin 6(Prdx6)对急性肺损伤的抗氧化保护作用.方法应用100% O2吸入诱导雄性小鼠,建立急性肺损伤模型,用H2O2干预诱导,建立细胞损伤模型.分别观察Prdx6基因敲除(Prdx6-/-)小鼠、Prdx6基因过度表达(Tg Prdx6)小鼠、胞浆谷胱甘肽过氧化物酶(Gpxl)基因敲除(Gpxl-/-)小鼠、野生(WT)小鼠及其肺Ⅱ型上皮细胞的生存率,支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白和细胞总数;Western Blot法检测Prdx6或Gpx1蛋白表达水平;观察肺Ⅱ型上皮细胞凋亡情况;采用硫代巴比妥酸反应物法和双苯酯-1磷酸芘荧光测定法分别检测肺组织和肺Ⅱ型上皮细胞膜质脂氧化水平.结果 Prdx6-/-小鼠生存时间较WT小鼠缩短约24 h,TgPrdx6小鼠的生存时间较其他组延长;在细胞损伤模型中,Prdx6对细胞生存的保护作用与H2O2干预浓度相关;高氧吸入72 h后,Prdx6-/-小鼠的肺内Gpx1蛋白表达水平下调7倍;Gpx1-/-小鼠的肺内Prdx6蛋白表达水平则无明显下调.H2O2干预处理后,肺Ⅱ型上皮细胞凋亡细胞数及百分率的增加与H2O2剂量正相关,并在Prdx6-/-小鼠表现为明显,而Tg Prdx6小鼠组则呈现了持续稳定的10%的凋亡细胞数;Prdx6-/-小鼠组的肺Ⅱ型上皮细胞的细胞膜脂质氧化水平升高,约为WT小鼠2倍,为Tg Prdx6组4倍;Prdx6-/-小鼠肺组织的脂质氧化水平较其他组明显增高.结论 Prdx6具有重要的抗氧化性肺损伤的保护作用,特别是Pxdx6抗细胞凋亡和抗细胞膜脂质氧化的功能提示了其以细胞为单位独特的保护机制.
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Peroxiredoxin 6在氧化损伤人视网膜色素上皮细胞中的表达
目的 探讨Peroxiredoxin 6(Prx6)在体外培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中的表达情况,以及在人RPE细胞受到不同浓度的H2O2攻击时Prx6表达量的变化.方法 复苏培养人RPE细胞传至第3代,实验分为正常对照组和不同浓度H2O2攻击组(0.125 mmol·L-1、0.25 mmol·L-1、0.5 mmol·L-1、1 mmol·L-1),加入H2O2,后24 h收集细胞.通过免疫组织化学和RT-PCR法检测各组细胞Prx6的表达情况,同时应用MTT法检测各组细胞的存活率.结果 免疫组织化学和RT-PCR结果显示培养的正常RPE细胞中即有Prx6的表达.0.125 mmol·L-1.H2O2攻击组Prx6阳性表达量较正常组增多(4倍),0.25 mmol·L-1和0.5 mmol·L-1H2O2,攻击组Prx6阳性表达量逐渐减少,1 mmol·L-1H2O2攻击组Prx6表达为阴性.MTT结果显示在H2O2浓度为0.125 mmol·L-1时,细胞的存活率仅轻微下降(91%),与正常组相比无统计学意义(P=0.086);在浓度为0.25 mmol·L-1、0.5 mmol·L-1和1 mmol·L-1时,细胞的存活率明显下降,分别为83%、74%和52%,与正常组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 适量的氧化攻击可以诱导RPE细胞Prx6表达增高,进而保护细胞免受氧化损伤.
关键词： Peroxiredoxin6 人视网膜色素上皮细胞 过氧化氢
