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酸性成纤维细胞生长因子对大鼠急性肺损伤的影响
目的 探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)的作用及其影响机制.方法 将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为3组:阴性对照组、脂多糖损伤组、aFGF干预组,每组20只.采用经气管插管给予脂多糖5 mg· kg-1制备大鼠ALI模型,aFGF干预组则于给予脂多糖24 h后,经气道给予aFGF 1 000μ·g-1.3组均于48 h后苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,计算肺损伤评分,测定肺水清除率,称量肺湿/干重比,免疫组织化学染色法观察肺泡表面活性蛋白C(SP-C)的表达,酶联免疫吸附试验法测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平.蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白表达水平.数据采用单因素方差分析(进一步两两比较采用LSD法)或非参数检验.结果 (1)aFGF干预组肺损伤评分[(6.33±0.42)分]与脂多糖损伤组肺损伤评分[(11.00 ±0.37)分]较阴性对照组[(1.01±0.26)分]均升高,但aFGF干预组肺损伤评分明显低于脂多糖损伤组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2) aFGF干预组肺水清除率[(27.41±1.05)％]与脂多糖损伤组肺水清除率[(15.59±0.64)％]较阴性对照组[(30.63±0.91)％]均有所下降,但aFGF干预组明显高于脂多糖损伤组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)脂多糖损伤组肺水聚集(肺湿/干重比为6.32±0.32)较阴性对照组(4.17±0.05)明显升高,aFGF干预组(5.18 ±0.10)也高于阴性对照组,但与脂多糖损伤组相比,肺湿/干重比有所改善且差异有统计学意义(P＜0.05).(4)aFGF干预组TNF-α水平[(762.50 ±23.93) pg/mL]与脂多糖损伤组TNF-α水平[(1460.01±17.96) pg/mL]较阴性对照组[(49.51 ±10.75) pg/mL]均明显升高,但aFGF干预组较脂多糖损伤组有明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)aFGF干预组p-p38 MAPK/β-actin比值(0.38 ±0.01)明显高于阴性对照组(0.18±0.01),差异有统计学意义(P＜0.05),且明显高于脂多糖损伤组(0.12±0.01),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 aFGF对脂多糖诱导的ALI大鼠具有肺保护作用,其机制可能为aFGF通过激活p38 MAPK通路,减少细胞凋亡,促进肺泡上皮细胞再生所致.
关键词： 成纤维细胞生长因子1 急性肺损伤 脂多糖类 肺水清除率 -
葎草中黄酮类成分的分离鉴定及对小鼠肺水清除率的影响
目的：对草中主要黄酮类成分进行提取分离，并对其结构进行鉴定；探讨草中黄酮类单体成分对小鼠肺水清除率（AFC）的影响。方法草乙醇提取后，除色素，柱分离得单体成分，利用光谱法对其结构进行鉴定；通过气管给药后，酶标仪测定肺内吸出液的小牛血清白蛋白浓度的方法，计算木犀草苷（LGL）和大波斯菊苷（AGL）影响下的小鼠在体 AFC。结果草中的主要成分为木犀草苷和大波斯菊苷；二者均能促进 AFC。结论草中的主要成分均可降低肺内的积水。
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mTORC2介导的信号通路影响肺泡上皮钠通道对急性肺损伤肺组织的保护作用
目的 通过调控肺泡上皮细胞α钠离子通道(epithelial sodium channelα,ENaC-α)上游信号通路,探讨mTORC2/SGK1途径在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)情况下对肺水清除方面的作用机制.方法 将50只BALB/c雄性小鼠按随机数表法分成对照组、模型组、胰岛素组、雷帕霉素组及PP242抑制剂组,每组10只.滴鼻给予5 mg/kg LPS构建ALI动物模型.建模2h后,分别腹腔注射0.8 U/kg胰岛素、4 mg/kg雷帕霉素、60 mg/kg PP242干预,8h后处死小鼠.A549细胞分别以培养基、10 mmol/mL胰岛素、5 mmol/mL雷帕霉素、5 mmol/mL PP242处理.采用ELISA检测各组肺泡灌洗液(BALF)中IL-6及TNF-α浓度,并测量各组右上肺组织的湿/干质量比(W/D)评估肺水清除(alveolar fluid clearance,AFC),HE染色观察各组肺组织病理改变.采用Real-time PCR、Western blot、免疫荧光法检测A549细胞rictor、糖皮质激素调节蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-regulated protein kinase 1,SGK1)、磷酸泛素化连接酶(E3 ubiquitin protein ligase,Nedd4-2)及ENaC-α的表达.结果 体内实验发现,与模型组比较,胰岛素组小鼠BALF中IL-6 [(77.48 ±6.04)vs(49.17±8.49)pg/mL]和TNF-α[(116.2±13.5) vs (92.4±8.37) pg/mL]水平显著降低,并伴有湿/干质量比减低,病检示肺损伤程度减轻(P＜0.05).PP242抑制剂组BALF中IL-6[(77.48±6.04)vs (100.6 ±14.69) pg/mL]和TNF-α[(116.2±13.5) vs (192.5 ±16.01) pg/mL]水平上升,湿/干质量比显著升高,肺组织损伤明显,程度较模型组更重(P＜0.05).而雷帕霉素组与模型组中各项指标及病理学改变差异无统计学意义(P＞0.05).体外实验中,A549细胞中rictor、SGK1、Nedd4-2及ENaC-α mRNA和蛋白表达在胰岛素组明显增高,在PP242抑制剂组中明显降低(P＜0.05),而在雷帕霉素组中无明显改变(P＞0.05).结论 调控mTORC2/SGK1信号通路可影响ENaC-α的表达,从而发挥其在ALI情况下对肺组织的保护作用.
关键词： 肺泡上皮钠通道 mTORC2/SGK1 急性肺损伤 肺水清除率 -
α肾上腺素对重症急性胰腺炎大鼠肺脏水调节能力的研究
目的 探讨α肾上腺素对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型中肺脏水调节能力的影响.方法 15只SD大鼠随机分为假手术组和SAP组,SAP组根据造模后取材的不同时相分为SAP 4 h组和SAP 24 h两个亚组,每组5只大鼠.测定各组大鼠肺脏的肺水清除率(AFC),然后进一步应用α1肾上腺素抑制剂prazosin和α2肾上腺素抑制剂yohimbine处理SAP组大鼠后再观察AFC的变化.用real-time PCR方法测定α1和α2肾上腺素受体mRNA在各组大鼠肺脏组织中的表达.结果 ①各组肺脏湿干比变化:与假手术组比较,SAP组4 h(P＜0.05)和24 h (P＜0.05)时的肺脏湿干比均明显下降;与SAP组4h时比较,SAP组24 h时的肺脏湿干比进一步降低(P＜0.05).②AFC变化:SAP组大鼠肺脏在4h和24 h时的AFC均明显高于假手术组(P＜0.05),但SAP组24 h时较4h时轻度下降,但差异无统计学意义(P＞0.05).经过α1肾上腺素受体抑制剂prazosin或α2肾上腺素受体抑制剂yohimbine作用后,其AFC较SAP组相应时相均明显下降(P＜0.05),但仍明显高于假手术组(P＜0.05);经prazosin和yohimbine联合作用后,其AFC较SAP组、SAP+prazosin组和SAP+yohimbine组相应时相均明显下降(P＜0.05),几乎完全抑制到假手术组的水平(P＞0.05).③SAP组4h和24h时,大鼠肺脏组织中α1和α2肾上腺素受体mRNA表达水平均明显高于假手术组(P＜0.05),但SAP组24 h时较SAP组4h时仅轻度下降,二者比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本研究初步研究结果提示,α1、α2肾上腺素受体均可能参与了大鼠SAP时肺脏水的调节.
