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促肾上腺皮质激素非依赖性肾上腺大结节增生相关microRNA的筛选和初步验证
目的 筛选与促肾上腺皮质激素非依赖性肾上腺大结节增生(adrenocorticotropinindependent macronodular adrenal hyperplasia,AIMAH)发病相关的微小核糖核酸(microRNA),从microRNA角度阐述AIMAH的发病原因.方法 ①与AIMAH相关microRNA的筛选:收集AIMAH病变肾上腺组织和正常肾上腺组织各5例.使用Trizol试剂提取总RNA,使用Nanodrop2000及变性琼脂糖凝胶进行RNA质量检测.使用Hy3TM标记样本,与miRCURYTM芯片杂交,使用GenePix 4000B芯片扫描仪及GenePix proV6.0进行图像采集和数据分析.以两样本microRNA荧光校正值的比值≥3.0为表达上调,比值≤0.3为表达下调,筛选出AIMAH与正常肾上腺组织之间的microRNA差异表达.②差异microRNA的验证:收集AIMAH病变肾上腺组织40例,正常肾上腺组织10例,使用实时定量逆转录聚合酶链反应方法进行验证,找出AIMAH与正常肾上腺组织的差异表达microRNA.结果 ①芯片结果显示,AIMAH与正常肾上腺组织之间差异表达的microRNA为12个,其中7个上调,分别为hsa-miR-663、hsa-miR-498、hsa-miR-638、hsa-miR-501-5p、hsa-miR-585、hsa-miR-557、hsa-miR-144;5个下调,分别为hsa-miR-744、hsa-miR-143、hsa-miR-26a、hsa-miR-22、hsa-miR-29a.②验证结果显示,AIMAH与正常肾上腺组织间差异表达的microRNA有4个,其中3个上调,分别为hsa-miR-663、hsa-miR-498、hsa-miR-557;1个下调,为hsa-miR-744.结论 与正常肾上腺皮质相比,AIMAH组织中存在microRNA差异表达,这些microRNA可能在AIMAH的发病中发挥作用.
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微小核糖核酸hsa-miR-663对肾上腺皮质细胞SW-13增殖及凋亡的影响
目的 在前期研究基础上,进一步探讨与促肾上腺皮质激素非依赖性肾上腺大结节增生(adrenocorticotropin-independent macronodular adrenal hyperplasia,AIMAH)发病相关的微小核糖核酸(microRNA)对肾上腺皮质细胞(SW-13细胞)增殖及凋亡的影响.方法 经前期筛选、验证研究发现AIMAH与正常肾上腺组织相比存在microRNA差异表达,其中hsa-miR-663表达明显上调.2015年10月至2016年2月,将hsa-miR-663作为目标microRNA,合成相应的microRNA mimics及inhibitors,转染SW-13细胞.通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)确认hsa-miR-663在SW-13细胞中的转染效果.根据RT-PCR结果将经转染的细胞系分为5个组进行对比研究,分别为SW-13空白对照组、mimics阴性对照组、inhibitor阴性对照组、hsa-miR-663过表达组、hsa-miR-663敲低组,应用MTT法检测各组细胞的生长曲线,应用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡.明确hsa-miR-663对SW-13细胞增殖及凋亡的影响.结果 采用RT-PCR确认,在mimics转染的细胞中,hsa-miR-663过表达;在Inhibitors转染的细胞中,hsa-miR-663表达敲低.MTT结果显示,与正常对照组及阴性对照组相比,hsa-miR-663过表达组细胞增殖明显,敲低组细胞增殖显著下降.Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,与正常对照组及阴性对照组相比,hsa-miR-663过表达组细胞凋亡无明显变化,敲低组细胞凋亡轻度增加,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 hsa-miR-663过表达可以促进SW-13细胞增殖,可能与AIMAH发病相关.
