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乙肝病毒X蛋白活化c-Src激酶诱导肝癌细胞发生上皮-间充质转化的机制
目的 探讨在乙肝病毒X蛋白(HBx)诱导肝癌细胞上皮-间充质转化(EMT)过程中癌基因c-Src的作用.方法 通过HBx基因转染诱导SMMC-7721肝癌细胞发生上皮-间充质转化,量化分析实验组和对照组细胞c-Src激酶的活化情况.抑制c-Src活性,通过实时PCR、蛋白印迹、免疫细胞化学等方法评价c-Src活化对上皮-间充质转化的影响.结果 发生上皮-间充质转化的SMMC-7721细胞中c-Src活化显著增加.给予c-Src激酶抑制剂PP2后,细胞由梭形恢复原来的上皮表型,而给予安慰剂PP3细胞形态无明显变化.蛋白印迹、免疫细胞化学检测进一步证实,抑制c-Src活化能逆转HBx基因转染诱导的上皮-间充质转化,使细胞再次发生间叶-上皮样转化,即上皮标志物(E-cadherin、α-catenin)表达显著上调,间叶标志物(N-cadherin,Vimentin,Fibronectin)表达显著减少.结论 HBx蛋白诱导SMMC-7721肝癌细胞发生上皮-间充质转化时,c-Src活化发挥了关键作用.
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c-Src激酶对脂多糖致炎过程中occludin蛋白表达的影响
目的 探讨在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理小鼠肺泡上皮细胞(mouse lung epithelial-12,MLE-12)过程中,c-Src激酶对occhdin蛋白表达的影响. 方法 将培养的MLE-12细胞按随机数字表法分3组(每组3孔细胞):对照组(C组)、LPS实验组(L组)、LPS+c-Src激酶抑制剂PP2组(L+P组).C组不做任何处理;L组用LPS(浓度为10 mg/L)处理,处理时间为1、3、6 h;L+P组用PP2(浓度为100 μmol/L)预处理60 min,然后LPS(浓度为10 mg/L)处理6h.Western blot法和免疫荧光染色法分别检测各组不同时间点occludin蛋白的表达. 结果 Western blot发现,与C组比较:L组中6h时点occludin蛋白表达下调明显、c-Src表达明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与L组6h比较,L+P组occludin蛋白表达上调(P＜0.05).免疫荧光染色显示,occludin蛋白主要表达于细胞膜上,LPS影响occludin蛋白在膜上分布,PP2可以减轻LPS的影响. 结论 LPS导致MLE-12细胞紧密连接蛋白occludin表达下调,c-Src激酶参与其调节.
