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三种HLA-A/0201限制性表位肽尤文肉瘤树突状细胞疫苗的抗肿瘤免疫作用
目的比较不同EWS/FLI-1蛋白HLA-A/0201限制性表位肽对尤文肉瘤树突状细胞(dendriticcell，DC)疫苗的抗肿瘤作用。方法综合运用BIMAS、SYFPEITHI软件筛选与人白细胞抗原HLA-A/0201结合力强的EWS/FLI-1蛋白9肽表位，并合成其表位肽。采用4 h标准51Cr释放实验检测刺激细胞毒性T淋巴细胞( cytotoxic T lymphocytes，CTLs )对肿瘤细胞的杀伤效应。应用酶联免疫斑点法( enzyme linked immunospot assay，ELISPOT )检测表位肽对DC疫苗刺激的效应细胞γ-干扰素( interferon，IFN-γ)的释放。在此基础上，进行免疫治疗的动物实验，比较其体内抗肿瘤作用。结果筛选出EWS306、EWS289及EWS 401与HLA-A/0201具较强的结合性，其合成出的表位肽分别为：QLWQFLLEL ( EWS 306)、ILGPTSSRL ( EWS 289)和SMYKYPSDI ( EWS 401)。3组表位肽均有较强的杀伤力，当效-靶比为50∶1时，杀伤率EWS 306组(20.2±1.8)%、EWS 289组(12.6±0.3)%、EWS 401组(11.9±0.2)%，而对照组为(6.7±0.1)%；当效-靶比为100∶1时，表位肽的三组杀伤作用明显提升，杀伤率EWS 306组高为(51.2±3.7)%、EWS 289组(24.6±2.1)%、EWS 401组(17.8±0.9)%，对照组为(7.2±0.2)%。EWS 306组同其它组比较，差异有统计学( P＜0.05)。EWS 306组分泌的IFN-γ为(118.3±3.6)个点明显高于EWS401组(35.1±1.0)个和EWS 289组(34.2±0.9)个，对照组为(5.0±0.1)个( P＜0.05)。EWS 306组肿瘤的体积(978.9±28.2) mm3明显小于阴性对照组(1992.9±16.1) mm3和空白对照组(2001.9±12.3) mm3( P＜0.05)。接种后第35天，EWS 306组存活率为80%大于空白对照组为0%、阴性对照组为10%( P＜0.05)；接种后第40天，空白对照组降为0%， EWS306组为80%明显大于和2个对照组(P＜0.05)。结论 EWS/FLI-1蛋白表位肽中EWS306较EWS289和EWS 401对DC的抗肿瘤作用更强，能够有效激活CTLs对肿瘤细胞的杀伤效应，为尤文肉瘤的免疫治疗提供了新的方向。
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树突状细胞负载人工合成甲胎蛋白表位肽后诱导的细胞毒作用
目的 观察HLA-A2树突状细胞(dendritic cells,DCs)负载人甲胎蛋白(human α-fetoprotein, hAFP) HLA-A2限制性九肽(FMNKFIYEI,AFP158-166)后,激活特异的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs),杀伤肝癌细胞株的能力.方法 用贴壁法分离HLA-A2成人外周血单核细胞,分次加入IL-4与GM-CSF共同诱导培养6 d,给予单核细胞调控培养液(monocyte conditioned medium,MCM)诱导成熟2 d,然后负载AFP158-166,激活特异性CTLs,用MTT法检测CTL杀伤肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞株HepG2和T2细胞株的能力.结果 采用贴壁法、多次加入细胞因子和MCM为成熟诱导剂的培养方法可以获得足量的成熟DCs,并且在去除细胞因子后,仍能保持成熟的DCs形态;负载AFP158-166的DCs激活的CTLs对HepG2和负载AFP158-166的T2具有较强的杀伤作用.结论 负载HLA-A2限制性表位肽AFP158-166的DCs对表达AFP的HLA-A2HCC有潜在的治疗作用,具有一定的临床运用前景.
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树突状细胞负载MAGE-n表位肽的体外免疫学效应研究
目的:研究树突状细胞(dendritic cell,DC) 负载MAGE-n表位肽QLVFGIEVV体外诱导特异性CTL 的能力及其抗肿瘤效应.方法:MAGE-n表位肽以固相多肽合成技术合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定,以流式细胞仪筛选HLA-A2+人外周血PBMC,连续贴壁法分离培养人外周血来源树突状细胞,用成熟的DC负载MAGE-n表位肽QLVFGIEVV反复刺激活化诱导抗原特异性CTL,用51Cr 释放法检测CTL的杀伤活性,并用抗HLA-A2分子单抗进行杀伤抑制实验.结果:用DC负载MAGE-n表位肽QLVFGIEVV可诱导特异性CTL反应,对MAGE-n阳性表达细胞有较强的杀伤作用.结论:DC负载抗原肽QLVFGIEVV在体外可诱发较强的特异性免疫反应.
