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RNA干扰沉默HDAC1基因对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究下调HDAC1的表达对大肠癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:设计合成HDAC1的特异性shRNA,将其插入至pSilencer载体中,并将重组后的pSilencer质粒载体经脂质体包裹转染SW480细胞株.用RT-PCR和Western blot检测shRNA对细胞内HDAC1基因表达的影响,同时采用Western blot对细胞周期相关基因进行检测.采用MTT法检测生长抑制作用.运用流式细胞术检测细胞的凋亡情况和细胞周期分布.结果:成功构建和筛选出HDAC1特异性的shRNA质粒载体,与空白对照组相比,转染HDAC1-shRNA的大肠癌细胞HDAC1 mRNA蛋白质表达水平明显下降(30.4%±4.5% vs 64.6%±4.4%,P<0.01;27.4%±4.5% vs 58.1%±3.3%,P<0.0 1),p21/WAF-1/CIP-1表达增加(97.4%±2.6% vs 62.6%±3.4%,P<0.01),CdK2和Cyclin E蛋白下降(CdK2:27.7%±6.0% vs 42.6%±4.1%,P<0.01;Cyclin E:42.0%±8.5% vs 82.8%±3.7%,P<0.01),细胞生长抑制率增加(24 h:35.9%±4.9% vs 1.2%±0.6%,P<0.01;48h:47.5%±7.0% vs 1.3%±0.6%,P<0.01;72h:45.7%±6.2% vs 1.0%±0.5%,P<0.01;96h:48.2%±4.7% vs 1.2%±0.7%,P<0.01),凋亡率明显增加(31.3%±2.8% vs 3.9%4±0.7%,P<0.01),G0/G1期和G2/M期细胞比例增加(G0/G1:64.5%±0.9% vs 57.8%±1.8%,P<0.01;G2/M:17.4%±1.3% vs 14.5%±0.6%,P<0.05),S期细胞比例相应下降(17.5%±1.0% vs 27.7%±1.5%.P<0.01).结论:HDAC1特异的shRNA能够有效下调HDAC1基因,诱导大肠癌细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞的增殖.
关键词： HDAC1基因 短发卡状RN&大肠癌 凋亡 增殖 逆转录聚合酶链反应
