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全氟化碳通过下调TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖刺激 A549细胞分泌 TNF-α的研究
目的：探讨全氟化碳对内毒素诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549细胞）炎症因子TNF-α表达的影响及机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞，传代培养后，均分为3组：空白对照组（C组）、脂多糖（LPS）组、全氟化碳＋LPS（P＋LPS 组），P＋LPS 组在给予 LPS 同时加入全氟化碳， LPS 的终浓度为10μg/ml，全氟化碳的终浓度为12.5%，各组分别孵育30 min、2 h、4 h、12 h、24 h，结束后用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子-κB（NF-κB）、Toll 样受体4（TLR4）蛋白表达水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清中 TNF-α的水平。结果（1）Western blot结果显示，C 组人肺泡Ⅱ型上皮细胞上有 TLR4蛋白的表达，但表达量较低；LPS 组人肺泡Ⅱ型上皮细胞在30 min、2 h、4 h、12 h、24 h 点 TLR4及 NF-κB 蛋白的表达量明显高于 C 组（P＜0.05）；与 LPS 组比较，P＋LPS 组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h 点 TLR4及 NF-κB 蛋白表达明显下降（P＜0.05），C 组人肺泡Ⅱ型上皮细胞的 TLR4及 NF-κB 蛋白表达量与 P＋LPS组相比，无明显差异（P＞0.05）。（2）ELISA 结果显示，与 C 组比较，LPS 组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h 点 TNF-α均明显升高（P＜0.05）。P＋LPS 组人肺泡Ⅱ型上皮细胞30 min、2 h、4 h、12 h、24 h 点 TNF-α较 LPS 组均明显降低（P＜0.05）。结论（1）TLR4可能介导了 LPS 诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应。（2）全氟化碳减轻 LPS 诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞的炎症反应，可能与抑制细胞表面 TLR4的信号活化，进一步抑制下游 NF-κB 的转导路径，从而降低 TNF-α的产生有关。
