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不同的胚胎密度、培养液体积及微孔培养对小鼠早期胚胎发育的影响
目的:通过比较不同胚胎密度和培养液体积及微孔(WOW)培养系统对小鼠早期胚胎发育的影响,以期优化早期胚胎发育的培养条件和环境,提高胚胎的发育率和质量。方法(1)在液状石蜡覆盖的20μl的发育液小滴中培养5、10、20和40枚2-细胞胚胎,观察并统计8-细胞率、囊胚率和孵化囊胚率。(2)15枚2-细胞胚胎放入在5、10、20、50、100μl的发育液小滴和500μl WOW系统(每个WOW中放一枚胚胎)中,观察并统计8-细胞率、囊胚率和孵化囊胚率。(3)对各组得到的囊胚进行差异染色并计数。结果在不同胚胎密度的比较中,20μl的培养液小滴中培养10枚2-细胞胚胎得到了较高的8-细胞胚胎率、囊胚率和孵化囊胚率,而且得到囊胚的 ICM、TE和ICM+TE的平均细胞数显著高于5枚和40枚胚胎组。在不同培养液体积和WOW培养系统中,5μl培养液组在各阶段胚胎发育率和得到囊胚的ICM、TE和ICM+TE的平均细胞数方面显著低于其他各组。500μl WOW培养系统组在各阶段胚胎发育率方面与得到较高发育率的20μl和50μl培养组均没有统计学差异,同时500μl WOW培养系统和20μl培养液组在孵化囊胚率和得到囊胚的ICM、TE和ICM+TE平均细胞数方面显著高于100μl培养液组。结论20μl的培养液小滴培养10枚胚胎可以得到较高的胚胎发育率,且得到的胚胎质量较好。较少的培养液体积不利于胚胎发育,较适宜的培养液小滴体积为20~50μl。同时,WOW培养系统在本实验条件下取得了较好的胚胎发育效果。