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不同血清微环境体外培养的 CIK 细胞中CD4＋/CD8＋和Th1/Th2的动态改变
目的：观察不同血清微环境中培养的细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer，CIK） CD4＋/CD8＋和Th1/Th2的动态改变，探讨有利于恢复肿瘤患者CD4＋/CD8＋和Th1/Th2平衡的CIK细胞培养血清微环境和适CIK细胞回输时机。方法将3例不同患者来源的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）用含10%肿瘤患者自体抗凝血浆培养基（ZT）在体外诱导培养成CIK细胞，并设含10%胎牛血清培养基（FBS）和无血清培养基（GT）作为对照。连续记录CIK细胞在三组血清微环境中的增殖情况，并分别收集培养第0、7、14和21天的CIK细胞和细胞培养上清。MTT法检测CIK细胞毒活性。流式细胞术检测CIK细胞CD3＋、CD4＋和CD8＋免疫表型。ELISA法检测细胞培养上清中Th1和Th2优势细胞因子IFN-γ和IL-13浓度，二者浓度比即为Th1/Th2比值。结果（1）CIK细胞增殖情况：三个血清微环境组间无显著差异。（2）CIK细胞肿瘤杀伤活性：培养至第7、14和21天的CIK细胞对K562的杀伤活性在不同血清微环境组依次为：ZT：（79.95±12.23）%、（93.86±2.38）%、（66.34±7.54）%，FBS：（71.02±14.79）%、（83.72±5.63）%、（58.37±7.57）%，GT：（40.92±4.66）%、（52.61±8.05）%、（41.43±5.25）%，CIK细胞肿瘤杀伤活性在同一血清组不同时间点间比较结果为ZT和FBS组在第14天均显著高于第7天和第21天（P＜0.01）；GT组在不同时间点间无显著差异。在不同血清微环境组相同时间点间比较的结果发现在第7、14和21天三个时间点，ZT和FBS组均显著高于GT组（P＜0.01）。（3）CIK细胞中CD4＋/CD8＋的动态改变：同一血清组不同时间点间的比较结果显示在第0天，肿瘤患者来源的PMBC CD4＋/CD8＋倒置，ZT组CD4＋/CD8＋在第7天升高至2.25±1.67，显著高于第0天（P＜0.05），但随即在第14天和第21天又恢复倒置现象；FBS组CD4＋/CD8＋一直维持倒置现象，并在第21天降低至0.04±0.55，极显著低于第0天（P＜0.01）；GT组CD4＋/CD8＋亦一直维持倒置现象，且在4个时间点间无显著差异。在相同的时间点不同血清微环境组间比较的结果显示在第7天，CD4＋/CD8＋比例在ZT组显著高于FBS和GT组（P＜0.05）；在第14天和第21天，三组间无显著差异。（4）CIK细胞中Th1/Th2的动态改变：CIK细胞Th1/Th2在相同血清组不同时间点间比较发现ZT和GT组在4个时间点一直维持Th1/Th2倒置，且4个时间点间无显著差异；FBS组Th1/Th2在第7天和第14天均极显著高于第0天（P＜0.01），Th1/Th2倒置现象被纠正，但在第21天又再次出现Th1/Th2倒置。在不同血清微环境组相同时间点间比较发现在第7天和第14天，FBS组Th1/Th2极显著高于ZT和GT组（P＜0.01）。结论不同血清微环境培养的CIK细胞CD4＋/CD8＋和Th1/Th2均呈动态改变趋势。提示在临床进行CIK细胞治疗时，应综合考虑患者的自身免疫状态、所采用的细胞培养血清微环境及CIK细胞培养过程中CD4＋/CD8＋和Th1/Th2的动态改变，制定个性化的治疗方案。
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不同血清微环境培养的施万细胞增殖状况比较
目的 将不同浓度大鼠血清、10％胎牛血清培养以及无血清培养的大鼠原代施万细胞的增殖状况进行比较,探讨适合施万细胞生长的血清微环境.方法 将所培养的原代施万细胞分成5％大鼠血清组、10％大鼠血清组、15％大鼠血清组、20％大鼠血清组、10％胎牛血清组、无血清组,另设不含细胞的空白对照组.采用CCK-8细胞增殖试剂,分别于培养后24、48、72、96、120h对各组的细胞增殖情况进行测定.结果 5％大鼠血清组的细胞在96h内的生长状况与10％胎牛血清组相比无显着差异.结论 在96h内,5％的大鼠血清浓度适合该细胞生长.
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血清微环境对小鼠T细胞衰老的调节作用
目的:探讨血清微环境对小鼠T细胞衰老的调节作用.方法:分别取年老(12～14月龄)及年轻(1.5～2月龄)小鼠各10只,提取其脾脏淋巴细胞及血清,实验分4组.组Ⅰ为年老鼠T淋巴细胞+10%年轻鼠血清;组Ⅱ为年老鼠T淋巴细胞+10%年老鼠血清;组Ⅲ为年轻鼠T淋巴细胞+10%年轻鼠血清;组Ⅳ为年轻鼠T淋巴细胞+10%年老鼠血清.培养48h后,经流式细胞术研究CD8+CD28+共表达率差异.结果:组Ⅰ和组Ⅱ T细胞表面的CD8+CD28+共表达率分别是(10.84±0.6841)%和(3.18±0.1789)%,组Ⅲ和组Ⅳ T细胞表面的CD8+CD28+共表达分别是(12.5±0.9445)%和(8.36±0.2074)%.各组间对比有统计学差异(P<0.05)结论:血清微环境具有调节小鼠T细胞衰老的作用,年轻鼠血清能使年老鼠的T细胞表面的CD8+CD28+共表达率提高,年老鼠的血清能使年轻鼠的T细胞表面的CD8+CD28+共表达率降低.
