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单层培养细胞文献资料
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单层培养细胞总RNA两种提取方法的比较
目的 探讨单层培养细胞总RNA提取过程中先行细胞消化或离心富集对所提RNA质量是否产生影响.方法 培养NGF诱导的PC12细胞,采用Trizol试剂提取RNA:离心组(A)先将贴壁生长细胞经胰酶消化、离心获得细胞沉淀,加入l ml Trizol进行RNA提取;直接组(B)将培养液弃尽后直接加入Trizol试剂(1 ml/10 cm2瓶壁)进行RNA提取;均采用琼脂糖凝胶电泳分析RNA完整性,紫外分光光度仪测定RNA浓度和OD260/OD280比值.结果 凝胶电泳结果显示,直接组出现3条清晰的条带(28S、18S和5S条带),离心纽在电泳末端5S区出现粗大的条带.两组OD260/OD28比值相似,约为1.6.直接组组间样品间RNA浓度相差较大.结论 采用离心法和直接法提取贴壁细胞总RNA,先行细胞离心富集增加了RNA降解机会,直接法提取的RNA质量较高,考虑对后续实验的影响,直接法更优于离心法.
