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Micro-dystrophin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗后mdx鼠MyoD和devMHC的变化
目的：观察经人微小抗肌萎缩蛋白（Micro - dystrophin）基因修饰的骨髓间充质干细胞（mMSCs）移植治疗的 mdx 小鼠成肌调节因子（MRFs）的表达。方法采用脂质体介导 Micro - dystrophin 基因转染 mdx 小鼠的 mMSCs通过尾静脉注射转染外源基因的 mMSCs 移植治疗 mdx 鼠，在移植后4周、8周、12周、16周分别应用免疫荧光、逆转录-聚合酶链反应（RT - PCR）、Western blot 三种方法检测腓肠肌内 MRFs 肌分化因子（ MyoD）和发育肌球蛋白重链（devMHC）的表达。结果免疫荧光结果显示对照组腓肠肌有少许 MyoD 表达，阳性率为（5.2±0.31）％，移植后4周组为（8.4±0.52）％，移植12周组为（19.8±1.63）％，移植16周组为（15.4±1.37）％。对照组腓肠肌可见少量devMHC 表达，阳性率为（1.1±0.18）％，移植后4周组为（7.4±1.33）％，移植12周组为（15.8±2.95）％，移植16周组为（21.9±3.62）％。移植后各组 MyoD 及 devMHC 阳性率较对照组升高（ P ﹤0.05），移植后一组与前一组比较差异有统计学意义（ P ﹤0.05）。RT - PCR 检测 MyoD 和 devMHC 的 mRNA 表达，Western blot 检测 MyoD 和 devMHC蛋白表达，移植后8周组 MyoD 表达灰度比值较对照组增高（ P ﹤0.05），12周时高，16周组较12周组下降；移植后8周组 devMHC 表达较对照组及4周组增加（ P ﹤0.05）；12周组较8周组升高（ P ﹤0.05）；16周组较12周组升高，但差异无统计学意义（ P ﹥0.05）。结论以 Micro - dystrophin 基因修饰的 MSC 移植治疗 mdx 鼠可能通过激活MRFs 的序列表达而促进成肌分化。
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Micro-dsytrophin基因修饰的骨髓间充质干细胞移植后mdx鼠膈肌病理改变
目的 探讨自体骨髓间充质干细胞(mMSCs)携带外源micro-dystrophin基因移植治疗mdx鼠对膈肌的影响.方法 采用脂质体介导micro-dystrophin基因转染mdx小鼠mMSCs(microdys-mMSCs),通过尾静脉注射移植治疗mdx鼠,对照组移植等量的PBS液.在移植后4周、8周、12周和16周测定受体鼠血清肌酸激酶(CK)值、对膈肌进行HE染色、计数核中心移位纤维(CNF)比率,并用免疫荧光及RT-PCR法检测micro-dystrophin的表达.结果 移植后血清CK值持续下降,各时间点膈肌病理改变较对照组有所改善,CNF比率下降,差异有统计学意义.免疫荧光可以检测到部分肌细胞膜能表达micro-dystrophin蛋白,并随移植时间延长micro-dystrophin阳性肌纤维比率增加,RT-PCR检测micro-dystrophin的mRNA有相同的趋势.结论 microdys-mMSCs移植治疗mdx鼠可以在受体鼠膈肌检测到micro-dystrophin的表达,减轻肌肉损伤并且改善mdx鼠膈肌的病理改变.
