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骨关节炎患者线粒体转录因子A表达与线粒体DNA拷贝数关系的研究
目的：研究膝关节骨关节炎患者与正常人外周血及关节软骨细胞中的线粒体转录因子A（ TFAM）表达和线粒体DNA拷贝数的关系，探讨其相关性。方法选择20例的膝关节骨关节炎患者为骨关节炎组，以正常关节软骨患者20例为对照组。各收集其外周血及关节软骨细胞，逆转录-聚合酶链反应（ RT -PCR ）及实时荧光 PCR（ SYBR GREEN I染料法）检测外周血及软骨组织中TFAM mRNA的表达水平和软骨细胞线粒体DNA拷贝数。结果骨关节炎组外周血和软骨细胞TFAM mRNA的表达量均低于正常组患者（ P <0.05），且二者表达量呈正相关（ P <0.01）；骨关节炎组线粒体DNA的平均拷贝数均于正常组患者软骨细胞（ P <0.01），且与软骨细胞TFAM mRNA的表达量呈正相关（ P <0.01）。结论 TFAM通过增加其线粒体DNA拷贝数，这将可以对骨关节炎的病因提出新的解释和补充，可能为骨关节炎的检测和治疗提供新的途径。
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TFAM重组腺病毒的构建及其对骨关节炎软骨细胞的保护作用
目的 通过构建重组腺病毒载体,转染骨关节炎软骨细胞,探讨线粒体转录因子A(TFAM)保护软骨细胞退变的作用.方法 构建TFAM重组腺病毒载体,并转染骨关节炎软骨细胞.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹法检测转染后细胞中TFAM mRNA及蛋白的表达情况；鉴定转染后软骨细胞线粒体DNA拷贝数的变化.结果 成功构建TFAM重组腺病毒,且体外转染率高；RT-PCR结果示细胞转染后MOI为500、1 000组TFAM mRNA的表达明显升高(P＜0.01)；Western印迹结果示转染后MOI为500、1 000两组TFAM蛋白表达均升高,其中MOI=1 000组表现为明显(P＜0.01)；骨关节炎细胞组线粒体DNA的平均拷贝数为(389±117),而MOI=500组为(575±144),MOI=1 000组为(762±179),前者显著低于后两者(P＜0.01).结论 转染TFAM重组腺病毒可正向增强其在软骨细胞中的表达,保持线粒体DNA结构的稳定性.
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淫羊藿苷对人骨关节炎软骨细胞增殖凋亡的影响
目的 研究淫羊藿苷对人骨关节炎软骨细胞增殖凋亡的影响.方法 体外分离培养人骨关节炎软骨细胞,用不同浓度的淫羊藿苷作用于人骨关节炎软骨细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养液上清中白细胞介素-1β(IL-1β)水平,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达.结果 0、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL的淫羊藿苷作用后的骨关节炎软骨细胞OD值依次为(0.58±0.04)、(0.76±0.06)、(0.92±0.07)、(1.26±0.09),凋亡率依次为(9.35±0.27)％、(8.69±0.11)％、(7.41±0.12)％、(6.87±0.09)％,细胞分泌的IL-1β依次为(10.53±0.97)pg/mL、(7.94±0.84)pg/mL、(6.05±0.71)pg/mL、(5.02±0.49)pg/mL,MMP-1水平依次为(0.25±0.02)、(0.20±0.01)、(0.16±0.01)、(0.11±0.02),MMP-3水平依次为(0.11±0.01)、(0.08±0.01)、(0.05±0.01)、(0.02±0.01),MMP-13水平依次为(0.39±0.03)、(0.30±0.02)、(0.21±0.01)、(0.19±0.01).以上各项指标比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 淫羊藿苷能够促进人骨关节炎软骨细胞增殖,抑制人骨关节炎软骨细胞凋亡,作用机制可能与细胞分泌的IL-1β和细胞中MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达水平有关.
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人髌下脂肪垫干细胞与骨关节炎软骨细胞间接共培养可促进其向软骨细胞分化
目的 将人髌下脂肪垫干细胞(IPFPSC)及骨关节炎软骨细胞(OAC)进行间接共培养,促进OAC软骨表型的恢复及诱导IPFPSC向软骨细胞分化.方法 体外分离、培养人IPFPSC及OAC,分为单独IPFPSC组、单独OAC组及IPFPSC和OAC间接共培养组,体外成软骨诱导21 d后,通过HE染色、Alcian蓝染色、免疫荧光细胞化学染色检测细胞1型胶原蛋白(Col1)、Col2、Col10、聚集蛋白聚糖(aggrecan)及SOX-9的表达情况.结果 共培养组OAC聚集成微球,IPFPSC呈椭圆形;单独组OAC聚集分布,排列松散,单独组IPFPSC呈长梭形.HE染色显示共培养组OAC聚集成团,核染色深,IPFPSC呈椭圆形,胞质丰富,呈旋涡状生长;单独组OAC聚集分布,核染色浅;单独组IPFPSC呈长梭形,核染色浅.Alcian蓝染色显示共培养组OAC及IPFPSC蛋白多糖分泌多,单独OAC及单独IPFPSC组分泌少.免疫荧光细胞化学染色显示共培养组IPFPSC及OAC中Col2、aggrecan及SOX-9表达较强,Col1与Col10表达较弱;而单独培养的IPFPSC及OAC组则相反.结论 IPFPSC和OAC间接共培养可以促进OAC软骨细胞表型的恢复及诱导IPFPSC向软骨细胞分化.
