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FLT3信号通路介导常规树突状细胞启动和调节急性肺损伤早期炎症反应的机制研究
目的 明确FLT3信号通路依赖的肺常规树突状细胞(cDCs)对急性肺损伤(ALI)早期炎症反应和肺损伤的影响及其调控机制.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只按随机数字表法分为正常对照组、ALI组、FLT3L预处理组、来他替尼预处理组和DMSO对照组,分别给予FLT3L、来他替尼预处理5d后采用LPS气道内滴入复制ALI模型,6h及24h后处死小鼠留取肺组织,采用流式细胞术检测CD11c+ CD11b+双阳性细胞比例评价肺cDCs的数量,检测肺cDCs的MHCⅡ及CD80表达比例评价肺cDCs的成熟程度;ELISA检测IL-6、TNF-α评价肺部炎症反应的强度;计算肺湿质量/体质量比(LWW/BW)评价肺水肿程度;肺组织HE染色行组织病理学检查评价肺损伤程度;比色法检测肺MPO活性评价中性粒细胞的浸润;qRT-PCR检测转录因子T-bet及GATA-3mRNA的表达比例评价辅助性T细胞Th1/Th2亚群漂移;ELISA检测IFN-γ及IL-4表达评价Th1/Th2细胞因子的平衡.结果 肺cDCs聚集及成熟程度高峰出现于ALI成模后6h(P＜0.05).FLT3L预处理显著增加肺cDCs的聚集和成熟程度(P＜0.05),上调肺部炎症反应并加重肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著上升(P＜0.05).来他替尼预处理显著抑制肺cDCs的聚集和分化成熟(P＜0.05),下调肺部炎症反应并减轻肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著下降(P＜0.05).结论 肺cDCs可通过FLT3信号通路调节中性粒细胞的浸润和Th1/Th2免疫反应的平衡,进而启动和调节ALI早期炎症反应和肺损伤.
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小檗胺选择性诱导FLT3突变急性髓系白血病细胞MV4-11凋亡及其机制研究
目的 探讨小檗胺选择性诱导FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)基因突变急性白血病细胞凋亡及其可能作用机制.方法 应用MTT法比较小檗胺对FLT3突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4-11和野生型FLT3肿瘤细胞胰腺癌细胞株PANC-1、淋巴瘤细胞株Pfeiffer、肺癌细胞株A549增殖的影响;流式细胞术检测小檗胺处理MV4-11后细胞凋亡和细胞周期的变化;Western blotting法检测FLT3及下游信号分子磷酸化STAT5 (p-STAT5)蛋白的变化.结果 MTT结果显示,小檗胺作用于MV4-11细胞24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)值分别是(7.039±0.700)、(4.840±0.271)、(2.088±0.376) μmol/L,明显低于野生型FLT3肿瘤细胞株;小檗胺作用于MV4-11细胞48 h后,随着小檗胺浓度增加,凋亡细胞比例增高,细胞周期停滞在G0/G1期.小檗胺呈浓度依赖性下调FLT3突变蛋白和p-STAT5蛋白的表达.结论 小檗胺能选择性下调FLT3突变蛋白及其下游信号分子p-STAT5,诱导FLT3突变急性髓系白血病MV4-11细胞凋亡和生长抑制.
