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吡格列酮对缺血-再灌注大鼠心肌梗死面积和线粒体ATP敏感性钾通道的影响
目的 观察PPARγ激动剂吡格列酮对在体大鼠心肌缺血-再灌注心肌梗死面积、缺血面积及线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)影响,探讨其可能机制.方法 健康雄性SD大鼠54只,分为实验一和实验二完成.在实验一中24只大鼠随机分4组,每组6只:(1)假手术对照组(SO)行冠脉穿线但不结扎,4 h后取出心脏;(2)单纯I/R组于I/R前24 h由尾静脉注入0.9%生理盐水,开胸结扎冠脉前降支30 min,松解后再灌注4 h;(3)5-HD+吡格列酮组(5-HD+Pio)于I/R前24 h由尾静脉缓慢注入mitoKATP阻滞剂5羟基葵酸(10 ms/ks),30 min后再缓慢注入吡格列酮(3 mg/kg),持续5 min,24 h后处理同I/R组;(4)吡格列酮预处理组(Pio)于缺血-再灌注前24 h只注入吡格列酮(3 mg/kg),持续5min,余处理同(3).后三组结扎前降支30 min、再灌注4 h后取出心脏.Western blot法测P38MAPK、JNK和NFκB P65蛋白水平的表达.在实验二中SD大鼠30只,分为SO组、I/R组、Pio组、5-HD+Pio组及单纯5-HD组(于I/R前24 h由尾静脉缓慢注入5羟基葵酸10 mg/kg余同I/R组),再灌注4 h后,测心肌缺血及梗死范围.多组间比较采用单因素方差分析(SNK-q检验),采用SPSS 11.0软件系统分析,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 (1)与I/R组(34.93±5.55)%相比,Pio组梗死面积(20.24±3.93%)明显减少(P<0.05),5-HD+Pio组和5-HD与I/R组相比差异无统计学意义(P>0.05);除SO组外,其他各绀间心肌缺血面积差异无统计学意义(P>0.05).与SO组相比,I/R组P38MAPKmRNA、JNK mRNA及P38MAPK、JNKI、JNK2和NFκB P65蛋白表达水平明显增加(P<0.05);与I/R组相比Pio绀能抑制以上水平的过度表达(P<0.05).结论 吡格列酮预处理可通过减少心肌梗死范围起到抗缺血-再灌注损伤作用,该保护作用可能与开放线粒体ATP敏感性钾通道及下调P38MAPK、JNK及NF-κB P65蛋白表达活性有关.
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内毒素致大鼠急性肝损伤的机制研究
目的:观察内毒素致急性肝损伤模型大鼠不同时间点的肝脏功能及血清内毒素含量、肝脏组织中白介素6(IL-6)表达的水平、蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、NFκB p65亚基及其磷酸化蛋白的相对表达情况,以及TLR4、IL-6 mRNA的相对表达情况,初步探讨内毒素致大鼠急性肝损伤的时效性变化及作用机制.方法:腹腔注射LPS 5 mg/kg后,每0.5h测定一次动物肛温,采用断点法分别于造模后2、4、6、8、10h处死6只动物,剖取肝脏、脾脏、胸腺、肾上腺等组织,采用比色法测定采用肝脏功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及碱性磷酸酶(ALP)的活性,采用鲎试剂动态比浊法测定各组动物血清内毒素的含量,采用ELISA检测受试动物肝脏组织匀浆中IL-6的含量,运用Western Blot检测肝脏中TLR4、NFκB p65亚基及其磷酸化蛋白的表达,采用QRT-PCR测定肝脏中TLR4、IL-6 mRNA的相对表达情况.结果:LPS刺激后0.5h大鼠体温升高;1～2h时体温降低;4h～10h体温在不断升高,其中在4～4.5h增幅明显;4h组大鼠肝脏系数及脾脏系数显著升高;与0h组相比,各组大鼠血清内毒素含量均显著升高(P＜0.01),其中4h、6h、8h组大鼠血清内毒素含量为0h组的40倍以上;LPS刺激后各组大鼠血清ALT、AST、ALP含量均明显升高趋势,且在4h或6h时达到高;4h组大鼠肝脏中IL-6的含量均明显高于0h组;4h组大鼠肝脏中TLR4及NFκBp65亚基磷酸化的相对表达量比0h组明显升高;8h组大鼠肝脏中TLR4 mRNA的相对表达量有一定的升高趋势,4h组、6h组、8h组、10h组大鼠肝脏中IL-6 mRNA的相对表达量均有升高,其中4h和6h组差异显著.结论:内毒素致急性肝损伤模型大鼠造模4h后IL-6分泌增加,4h组大鼠肝脏组织TLR4功能加强,转核因子NFκB p65亚基的磷酸化程度增加,表明IL-6、TLR4、NFκB p65亚基三者在内毒素致肝脏组织损伤中起重要作用,LPS致急性肝损伤的作用机制与其上调TLR4-NFκB炎症信号通路中TLR4蛋白及NFκBp65亚基的磷酸化水平、增加致炎因子IL-6的表达等环节有关.
