首页 > 文献资料
-
质粒介导的RNAi技术对大鼠CⅡTA和MHCⅡ基因表达抑制的检测
目的 研究应用质粒介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术对大鼠MHC Ⅱ类分子反式激活因子(MHCclass Ⅱ transactivator,C Ⅱ TA)和MHC Ⅱ基因表达的抑制作用.方法 根据大鼠CⅡTA基因信息,设计合成3条短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)并构建质粒载体,于体外转染大鼠骨髓源树突状细胞(DC)及体内转染大鼠脾脏,采用实时定量RT-PCR技术检测转染后DC和脾脏的C Ⅱ TA及MHCⅡ的mRNA表达变化,流式细胞术检测转染后MHCⅡ蛋白表达变化.结果 成功构建shRNA质粒载体,3个shRNA质粒转染组的DC和脾脏转染后的CⅡTA和MHC Ⅱ的mRNA表达水平及MHC Ⅱ抗原表达水平均明显减低(P<0.01),其中第1条shRNA的质粒转染组抑制效果侍,C ⅡTA与MHCⅡ基因表达呈正相关.结论 应用C Ⅱ TA靶向shRNA质粒载体在体内外均能显著抑制C Ⅱ TA和MHC Ⅱ基因表达,为进一步基因治疗研究奠定实验基础.
-
缺氧状态下去乙酰化酶SIRT1对MHCⅡ的反式激活因子的调控机制研究
目的:探讨缺氧对SIRT1表达和活性的影响,及SIRT1对人体免疫功能的调节机制.方法:将人的原代外周血巨噬细胞在常氧和缺氧(1％O2)条件下培养,用Western blot方法检测细胞内SIRT1的蛋白表达变化,Real-time PCR检测SIRT1、NAMPT、HLA-DRα的mRNA水平,检测SIRT1的酶活性及NAD+/NADH的值.结果:SIRT1蛋白表达随缺氧时间的延长先降低后升高,缺氧12 h蛋白下降明显,24、36 h后回升,但表达量仍低于常氧；缺氧12h后,SIRT1、NAMPT的mRNA水平与常氧组比较明显降低(P＜ 0.05)；SIRT1的酶活性和NAD+/NADH的值显著低于常氧组(P＜ 0.05)；SIRT1激动剂白藜芦醇能够逆转缺氧诱导的HLA-DRα的mRNA表达下调.结论:缺氧通过调节巨噬细胞中SIRT1的mRNA水平、蛋白表达及酶活性,使得依赖Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)的HLA-DRα表达下降,提示SIRT1可能是一个新的值得关注的免疫调节相关蛋白.
-
MHC Ⅱ类分子胞内转运过程研究进展
MHCⅡ类分子在抗原提呈细胞内的转运过程可分为3个环节:1)新合成MHCⅡ类分子转运到内吞系统；2)存储在内吞系统中完成抗原提呈；3)从内吞系统转运到细胞表面活化CD4+T细胞.近年来研究显示此转运过程涉及自吞噬、泛素化等多种机制,而转运环节的改变将影响MHC Ⅱ类分子发挥其功能,导致免疫发育和免疫防御功能障碍,故本文将此领域研究进展进行综述.
