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球形孢子丝菌vps34基因序列的获得及其在双相型表达差异的初探
目的 获得球形孢子丝菌液泡分选蛋白34(vacuolar protein sorting 34,Vps34)编码基因全长序列,并探讨vps34基因在球形孢子丝菌(Sporothrix globosa)由菌丝相向酵母相转换中的作用.方法 利用快速扩增cDNA末端技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)方法分别扩增球形孢子丝菌vps34基因3′端和5′端序列,序列拼接后进行生物信息分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析vps34基因在菌丝相和酵母相的表达差异.结果 球形孢子丝菌vps34基因全长共3228 bp,其中CDS区长度为3000 bp,编码999个氨基酸,相对分子质量(Mr)为111.49×103,等电点为6.38,包含C2 PI3K classⅢ、PI3KaⅢ、PI3KcⅢ共3个结构域;qRT-PCR检测结果显示,24 h时,球形孢子丝菌酵母相的vps34表达量高于菌丝相(P<0.05),48 h时差异大(P<0.01).结论 vps34基因参与了球形孢子丝菌双相型转换的过程,而球形孢子丝菌vps34基因全长的获得为进一步研究Vps34p的功能提供实验资料.
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16株中国东北地区临床孢子丝菌菌种分子生物分类学研究
目的 测定孢子丝菌的基因序列并同参考序列进行系统发育学分析,鉴定孢子丝菌种,探讨准确高效的鉴别菌种的方法.方法提取既往根据组织病理鉴定为申克孢子丝菌的16株临床孢子丝菌株的基因组DNA,利用核糖体内部转录间隔区(Ribosomal Internal Transcribed Spacer,ITS)和部分p微管蛋白(β-tubulin)序列进行PCR扩增,扩增序列同来源于基因库(GenBank)的参考序列进行系统发育学分析.结果 基因组DNA分别扩增出约600 bp的ITS及约400 bp的β-ubulin编码基因,测序后构建的系统发育树分析显示所有的菌株均位于球形孢子丝菌分支上,该16株菌并非申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii,S.schenckii),而是球形孢子丝菌(Sporothrix globosa,S.globosa).结论 中国东北孢子丝菌病致病菌可能为球形孢子丝菌或并非只是单一的申克孢子丝菌,分子生物学鉴定方法更为准确,为临床快速有效鉴别孢子丝菌菌种奠定基础.
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DNA测序诊断孢子丝菌病三例
目的:本文报道通过对组织分子鉴定明确病原菌的孢子丝菌病3例.方法:提取3例怀疑孢子丝菌病患者活检组织中的真菌DNA,进行ITS区扩增、测序和比对;病变组织行组织病理学检测.对脓液和组织进行真菌镜检及培养,对培养阳性菌落进行形态学、分子生物学、糖同化实验鉴定以及体外药敏检测.结果:真菌镜检脓液见少量孢子、未见菌丝;病理检查提示感染性肉芽肿,抗酸染色及PAS染色均阴性;ITS区鉴定提示申克孢子丝菌;真菌培养、形态学及糖同化鉴定及calmodulin分子鉴定为球形孢子丝菌;药物敏感性检测显示其对特比萘芬高度敏感;口服特比萘芬250 mg/d;舍他康唑乳膏外用,治疗后明显改善.结论:直接提取病变组织DNA进行早期DNA测序能够尽早明确致病菌种并指导用药.
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球形孢子丝菌致面部孢子丝菌病
患者女，56岁，农民。
主诉：右面部红色丘疹、斑块1年。
现病史：患者于1年前无明显诱因右颊部出现一个针尖大小红色丘疹，后其周围出现类似几个丘疹，并逐渐增大融合成斑块，部分上覆少量黄色和暗红色痂，无明显瘙痒及疼痛。患者曾于外院就诊，具体诊断不详，未予治疗。后类似皮疹逐渐增多，向下蔓延至颏部及颏下部。否认局部外伤史。为明确诊断于2016年3月9日来我院门诊就诊。 -
皮肤固定型孢子丝菌病1例及其相关实验检查
患者男,50岁.左上臂皮肤溃疡2年.皮损组织病理示:炎性肉芽肿改变,PAS染色可见圆形孢子和星状体.皮损真菌培养阳性,菌种鉴定为球形孢子丝菌.确诊为皮肤固定型孢子丝菌病,给予患者口服伊曲康唑和特比萘芬联合治疗3个月,皮损部分改善.之后患者间断口服特比萘芬联合碘化钾治疗,一年半后复诊仍有局灶性皮损未愈.
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耳部孢子丝菌病1例
患者男,40岁.右耳起疹1年余.皮肤科情况:右侧耳轮至耳垂见多数米粒至绿豆大小暗红色丘疹,部分覆红褐色薄痂,表面轻度脱屑,耳垂部皮肤轻度肿胀.经组织病理检查、真菌培养及分子生物学鉴定,诊断:孢子丝菌病.予10％碘化钾口服治疗1个月,皮疹基本消退.目前仍在随访中.
