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血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达及功能研究
为了深入研究血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ(glycoprotein Ⅵ,GPⅥ)功能及筛选特异性抑制剂,利用基因重组技术体外表达GPⅥ胞外区片段.采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GPⅥ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA Resin纯化、复性;使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质;采用胶原结合试验测定重组蛋白的胶原结合能力.结果表明,经测序证明PCR扩增产物与GPⅥ胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量32 kD蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western blot分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合;胶原结合试验表明重组蛋白拥有较好的生物学功能.结论:正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性和生物学活性.
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血小板糖蛋白Ⅵ及其拮抗药物研究进展
胶原和血小板相互作用机制为进一步阐明血栓形成提供了依据;胶原与血小板糖蛋白受体(GPR)及其拮抗药的研究,为预防和早期治疗血栓性疾病开辟新领域.血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)是与胶原密切连接的血小板受体.本文综述了血小板糖蛋白Ⅵ的结构、生理功能及其与胶原的相互作用,并介绍其拮抗药研究的一些新进展.
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血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达
目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段.方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA,构建表达载体pET-20b(+)-GPⅥ,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA Resin纯化后复性;使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质.结果PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致;酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b(+)-GPⅥ;原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32 kd的蛋白条带,诱导产物以包涵体形式存在;Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合.结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白,纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性.
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血小板糖蛋白Ⅵ对缺血性脑卒中患者预后的影响
目的 研究缺血性脑卒中患者血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)水平与缺血性脑卒中预后的关系.方法 采用流式细胞术测定50例缺血性脑卒中患者发病后24 h内的血小板GPⅥ水平,分析其与神经功能缺损程度评分、预后的关系.结果 缺血性脑卒中患者血小板GPⅥ含量与病情轻重呈正相关(P＜0.01);与病情恢复程度呈负相关(P＜0.01).结论 缺血性脑卒中患者血小板GPⅥ含量对患者的近期预后有预测作用.
