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原核基因工程制备新型重组α-半乳糖苷酶应用于人B→O血型改造的研究
本研究利用基因工程方法制备脆弱类杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶并将其应用于人B→O血型改造.在获得了能够表达细菌α-半乳糖苷酶工程菌株的基础上,从诱导时间、诱导剂浓度两个方面对工程菌株的诱导条件进行优化,获得细菌α-半乳糖苷酶的佳可溶性表达条件;超声上清经过阳离子交换层析和阴离子交换层析等方法进行纯化.利用纯化后的α-半乳糖苷酶在磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中处理B型红细胞2小时,制备O型红细胞.结果表明细菌α-半乳糖苷酶佳诱导表达条件为:37℃、起始D(600)为0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为2小时.纯化后α-丰乳糖苷酶的纯度为电泳纯,比活由纯化前的0.42 U/mg提高到了2.1 U/mg.该酶在26℃、接近中性的pH条件(6.8)下经2小时可将B型红细胞改造成O型红细胞,需要的酶量为225μg/ml红细胞.结论:建立了重组细菌α-半乳糖苷酶的表达纯化工艺,制备的重组α-半乳糖苷酶可有效地将B型红细胞改造成O型红细胞,为B→O血型改造提供了更有效的工具酶.
关键词： 基因重组α-半乳糖苷酶 血型改造 B→O血型改造 -
用α-半乳糖苷酶制备可供输注的人通用型O型红细胞
研究的目的是将人群中28%的B型血改造成通用O型血,提高O型血的储存和使用比例,以缓解战争、恐怖袭击、突发事件等紧急状态下对O型血的大量需求.用α-1.3半乳糖苷酶作为B→O血型改造的工具酶,摸索改造一个使用单位B型血红细胞(100ml)的佳条件.结果实现了在密闭、无菌条件下使用50 U/ml工具酶,pH5.6,26℃2小时,进行B→O的血型改造.结论:改造后的通用型O型血红细胞符合生物制品检定规程的要求,并可在4℃存放21天.
关键词： 输血 O型红细胞 α-1.3半乳糖苷酶 血型改造 B→O血型改造 -
B→O血型改造装置控制系统的研制
为实现B→O血型改造过程的标准化、自动化,研制了一套B→O血型改造装置.重点介绍了B→O血型改造装置控制系统的研制,包括软件及硬件系统的设计.该控制系统为B→O血型改造过程提供了一种安全、高效的途径,为B→O血型改造在临床上的广泛应用奠定了基础.
