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恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体与按蚊Cecropin A融合基因的构建、原核表达及生物活性的初步评价
目的 构建、原核表达恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体与按蚊Cecropin A 融合基因并对其表达产物的生物学活性进行评价.方法 根据按蚊对编码同种氨基酸不同密码子的偏嗜性,对鼠源性恶性疟原虫动合子表面蛋白单链抗体4B7编码基因进行改造,并与按蚊抗菌肽Cecropin A基因融合;将融合基因Cep&m4B7克隆入原核表达载体pET32a(+)并在大肠埃希菌中进行表达;对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,体外抑菌试验鉴定表达蛋白的抑菌活性. 结果 构建了融合基因Cep&m4B7和重组表达质粒pET32a(+)-Cep&m4B7,融合基因在大肠埃希菌中以包涵体形式高效表达融合蛋白,Western blot显示重组蛋白能被抗6-His抗体识别;琼脂糖扩散法显示纯化后的目的 蛋白无抑菌活性. 结论 成功构建了融合基因Cep&m4B7,该基因在大肠埃希菌中高效表达,表达产物纯化后无体外抑菌活性.
