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柔嫩艾美耳球虫GZ株文献资料
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鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因在大肠杆菌中的表达
目的构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体,并且在大肠杆菌中表达. 方法将本室构建的pMD-Mz5-7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET-28b(+)载体上,构建成原核表达载体pET-28b-Mz5-7,酶切鉴定正确后,在Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,并经SDS-PAGE 及Western blotting 鉴定. 结果成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET-28b-Mz5-7,IPTG诱导表达该融合蛋白,SDS-PAGE电泳表明,其能表达一分子质量约为37 ku的融合蛋白,与预测分子质量相符,佳反应条件为1 mol/L IPTG诱导4 h后表达量高.薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18%,Western blotting结果显示,表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别,说明该融合蛋白具有很好的反应原性. 结论在原核细胞融合表达Mz5-7成功,为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础.
关键词： 柔嫩艾美耳球虫GZ株 大肠杆菌 表达 Western blotting
