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3种转染试剂介导siRNA转染蚊细胞的比较研究
目的 比较3种不同转染试剂介导siRNA转染蚊细胞的优缺点,选择优方法 用于转染后细胞存活率检测试验.方法 分别用FuGENE HD,X-tremeGENE和siPORT Amine 3种转染试剂介导特定siRNA转染蚊细胞,转染48 h后采用实时荧光定量PCR检测目的 基因的表达.比较3种方法 的干涉效率,转染试剂对细胞的毒性和不同方法 的操作步骤对实验结果 的影响.结果 FuGENE HD、X-tremeGENE和siPORT Amine转染后的干涉效率分别为70%、85%和29%;FuGENE HD和siPORT Amine对蚊C6/36抗性细胞毒性较小,X-tremeGENE对蚊细胞毒性较大;FuGENE HD的转染过程需要更换一次细胞培养液,X-tremeGENE的转染过程需要更换2次细胞培养液,siPORT A-mine的转染过程不需要更换培养液.结论 转染试剂的转染效果对于实验结果 有显著影响.在蚊细胞转染siRNA的实验中,FuGENE HD转染效率尚可,对细胞毒性小,转染过程只需1次换液操作;X-tremeGENE转染效率较高,对蚊细胞毒性较大,有2次换液操作;siPORT Amine毒性小且不需换液操作,但转染效率较低.综合评价:FuGENE HD更适用于转染siRNA后细胞存活率实验.
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四种转染试剂对H9C2细胞转染效率的比较
目的 比较4种不同转染试剂对大鼠心肌细胞H9C2细胞的转染效率,以选择优转染方法.方法 以带有增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的质粒作为外源基因,分别用4种不同转染试剂FuGENE HD、DNA-In CRISPR、Lipofectamine 3000和Lipofectamine 2000转染H9C2细胞,通过荧光显微镜观察和荧光酶标仪检测荧光强度来评价转染效率,并通过Cell Counting Kit-8 (CCK-8)试剂盒检测4种转染试剂对细胞活性的影响.结果 Lipofectamine 3000转染效率高(＞50％);而DNA-In CRISPR转染效率低(＜1％).4种转染试剂中Lipofectamine 3000对细胞毒性也低,转染48 h后细胞活性为94.55％.结论 转染试剂Lipofectamine 3000在保证相对较高的转染效率的同时也具有低的细胞毒性,更适合用于H9C2细胞的转染.
