您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
M2AP文献资料
-
弓形虫微线体蛋白MIC2和M2AP真核表达载体的构建
目的 构建弓形虫RH株微线体蛋白M2AP和MIC2的真核表达载pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为建立同时表达MIC2和M2AP蛋白的重组毕赤酵母表达系统,制备重组粘附蛋白复合体MIC2-M2AP奠定基础. 方法 提取弓形虫RH株速殖子总RNA,用Oligo dT-Adaptor引物逆转录合成cDNA.根据已知的弓形虫mic2和m2ap基因序列,采用引物设计软件Primer premier5.0白行设计并合成引物,以cDNA为模板,PCR扩增mic2和m2ap基因,克隆入pMD-19-simple-T载体,经酶切和测序鉴定后回收目的片段,分别插入至pGAPZαA内,构建重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,转化入E coli DH5α.提取转化菌质粒,进行酶切和测序鉴定. 结果 PCR扩增得到的mic2和m2ap基因分别为2 200 bp和1 000 bp,与预期大小一致.T-A克隆重组质粒pMD19-T-mic2、pMD19-T-m2ap和重组酵母表达质粒pGAPZαA-mic2、pGAPZαA-m2ap经测序鉴定,与GenBank收录的弓形虫mic2基因和m2ap基因序列同源性为100％,重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap构建成功. 结论 成功构建弓形虫重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为进一步研究MIC2和M2AP相互作用机制及其免疫保护效应奠定了基础.
