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PhoP/PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv的构建及鉴定
目的 构建PhoP和PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv(以下简称H37Rv),检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表达水平. 方法 提取并鉴定结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR,利用电转化技术将结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR导2H37Rv的感受态细胞中,构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv,应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平. 结果 成功构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv.应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平,其中在电压为2 300～2 500 V的范围内,电压越高,电转化菌的PhoP/PhoR基因表达量越高. 结论 成功构建了PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株,以电压为2 500 V电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达量较高.
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结核分枝杆菌PhoP蛋白的生物信息学分析
目的 应用生物信息学软件预测结核分枝杆菌PhoP基因编码蛋白的结构和功能. 方法 从NCBI数据库获取PhoP基本的基因信息及其编码序列氨基酸信息;应用ProtParam软件预测PhoP蛋白的理化性质;利用SignalIP4.1和TMHMM分析其信号肽和跨膜区;利用在线分析Expasy工具分析蛋白二级结构,建立蛋白三级结构模型;采用Bepipred 1.0 Server和SYFPEITHI分析蛋白的B细胞及T细胞抗原表位. 结果 PhopP蛋白共250个氨基酸,分子式为C1226H1974N346O364S4,原子总数3 914,半衰期为30 h,预测该蛋白为稳定性亲水性蛋白;二级结构中α-螺旋、β-转角、β-折叠、无规则卷曲分别占36.03％、10.58％、24.7％和27.94％,预测的B细胞、CTL细胞抗原表位分别为21个和7个;PhoP基因与天蓝色链霉菌同源性较高;其编码蛋白的相互作用蛋白为PhoR、senX3、trcS等. 结论 生物信息学分析PhoP为稳定蛋白,且含有潜在的B、T细胞抗原表位,是结核病诊断及治疗的潜在候选因子.
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鸟分枝杆菌二元调控系统PhoP基因的克隆与分析
目的：对鸟分枝杆菌调控因子PhoP的基因序列和氨基酸序列进行生物信息学分析。方法：利用PCR技术扩增鸟分枝杆菌HIV/AIDS临床分离株PhoP基因，与pEASY-T1载体连接后测序，运用生物信息学工具对其序列进行分析。结果：PCR产物显示一条<为720bp的条带，测序结果与GenBank数据库中鸟分枝杆菌104株PhoP基因序列完全一致。该分离株PhoP的基因和氨基酸序列与结核分枝杆菌H37Rv比对，同源性分别为86%和94%。分离株PhoP基因编码的氨基酸数目为239个氨基酸，其中从136到239位氨基酸为DNA结合区。结论：成功克隆出鸟分枝杆菌HIV/AIDS临床分离株的PhoP基因。该分离株PhoP的氨基酸序列与结核分枝杆菌具有高度的同源性。
